细胞简介 : Luciferase MFC细胞稳定表达萤火虫荧光素酶。该细胞株性状稳定，培养时不需要添加抗生素维持。可用作萤火虫荧光素酶活性检测中的阳性对照，也可用于活体动物成像实验。该细胞通过慢病毒转染的方式携带Luc基因MFC细胞是由钱书森、高进等于1985年建立；利用源自615小鼠前胃鳞癌移植瘤FC瘤组织，小块法培养得到，已传132代；MFC细胞细胞在615小鼠皮下移植100%成功。

puro药筛浓度 : MFC-LUC细胞puro药筛浓度为2.0ug/ml，培养过程中可不用再添加puro，如若担心抗性随着传代时间降低，可定期用1.0ug/ml浓度puro维持。加药需在细胞状态良好情况下。

细胞代数 : 10代以内

细胞规格 : 1x10?cells/T25培养瓶或者1mL冻存管

保藏机构 : 中国医学科学院基础医学研究所细胞资源中心

培养基 : DMEM+10%FBS+PS

培养条件 : 气相：95%空气+5%二氧化碳；温度：37℃

冻存条件 : 无血清冻存液，液氮储存

细胞货期 : 现货，1周左右

发货方式 : 复苏发货（T25瓶免运输费用）/ 冻存发货（需加干冰运输费用）

供应范围 : 仅限于科研实验使用，绝不可作为动物或人类疾病的治疗产品使用

细胞培养操作

T25瓶

收货处理 : 观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁，将T25瓶置于37度培养箱放置2-4h，以便稳定细胞状态

传代密度 : 细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养

传代比例 : 首次传代建议1：2传代，1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿

传代方法

a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.02% EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 -3min（视细胞消化情况而定），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加2-3ml完全培养基终止消化。轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心5 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。

c、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。

注意事项

1. 运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。

2. 因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰撞死亡破碎形成碎片，是正常现象。

冻存管

收货处理 : 收到细胞后，需立即转入液氮冻存或直接复苏

传代密度 : 第二天换液并检查细胞密度

传代比例 : 一管细胞建议接种到10cm培养皿或者T25瓶

传代方法 : 将含有1 mL细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入6 cm皿中，加入约4 mL完全培养基，培养过夜）。第三天换液并检查细胞密度。

注意事项

1. 收货时若发现干冰化完，检查冻存管是否融化，若已融化需直接离心细胞接种观察，若未融化可以将细胞按正常步骤保存。

2. 为保证细胞的高存活率，收到产品后，请立即解冻复苏细胞。

MFC-LUC/小鼠前胃癌细胞-荧光素酶标记)

细胞冻存操作

冻存液配方 : 无血清冻存液，液氮储存

细胞密度 : 待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例

冻存方法

a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。

b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5x10?~1x10?/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。

c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

注意事项