产品简介

细胞名称   :   A375/DDP人恶性黑色素瘤细胞顺铂耐药株

细胞品牌  :    通蔚生物

种属来源   :   人

组织来源   :   皮肤

生长特性   :   贴壁生长

细胞形态  :    上皮细胞样

细胞代数  :    10代以内

细胞规格  :    1x10?cells/T25培养瓶或者1mL冻存管包装

培  养  基  :    90% DMEM+10% FBS+PS

培养条件  :    气相：95%空气+5%二氧化碳；温度：37℃

冻存条件  :    无血清冻存液，液氮储存

发货方式   :   复苏发货（免运输费用）/  冻存发货（需加干冰运输费用）

供应范围  :    仅限于科研实验使用，绝不可作为动物或人类疾病的治疗产品使用

特别说明   :   具体操作步骤以随货产品说明书为主

细胞培养操作

T25瓶

收货处理  :   用75%酒精擦拭细胞瓶表面，放37度培养箱内静置培养2-4h，以便稳定细胞状态

传代密度  :   细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养

传代比例  :   首次传代建议1：2传代，1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿

传代方法 

a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.02% EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，将培养瓶置于37℃培养箱中消化2-5 min（视细胞情况而定），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加2-3ml完全培养基终止消化。轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心5 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。

c、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。

注意事项

1. 运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。

2. 因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰撞死亡破碎形成碎片，是正常现象。

冻存管

收货处理   :  收到细胞后，需立即转入液氮冻存或直接复苏

传代密度   :  第二天换液并检查细胞密度

传代比例   :  一管细胞建议接种到10cm培养皿或者T25瓶

传代方法   :  将含有1 mL细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入6 cm皿中，加入约4 mL培养基，培养过夜）第二天换液并检查细胞密度。

A375/DDP人恶性黑色素瘤细胞顺铂耐药株

注意事项

1. 收货时若发现干冰化完，检查冻存管是否融化，若已融化需直接离心细胞接种观察，若未融化可以将细胞按正常步骤保存。

2. 为保证细胞的高存活率，收到产品后，请立即解冻复苏细胞。

细胞冻存操作

冻存液配方  :  无血清冻存液，液氮储存

细胞密度  :  待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例

冻存方法 

a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。

b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5x10?~1x10?/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。

c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

注意事项

冻存细胞转入液氮后及时复苏一管检查细胞冻存活性，若有异常，及时调整实验方案

售后服务

细胞予重发

1. 细胞运输中遭遇的各种问题，细胞丢失瓶身破损、培养液严重漏液等，重发。

2. 收到细胞未开封，如出现污染状况，重发。

3. 收到细胞3天内，发现污染问题，经核实后，重发。

4. 常温发货的细胞静置2小时后，干冰冻存发货细胞复苏2天后，绝大多数细胞未存活，经核实后，重发。

5. 常温发货的细胞静置22小时并且未开封或干冰冻存发货的细胞复苏2天后，出现污染，经核实后，重发。

6. 细胞活性问题，请在收到产品3天内给我们提出真实的实验结果，用台盼蓝染色法鉴定细胞活力，经核实后，重发。

细胞不予重发 

1. 客户操作造成细胞污染，不重发。

2. 客户严重操作失误致细胞状态不好，不重发。

3. 非我们推荐细胞培养体系致的细胞状态不好，不重发。

4. 细胞状态不好，未提供真实清晰的培养前3天的细胞状态照片，不重发。

5. 细胞培养时经其它处理导致细胞出现问题的，不重发。

6. 收到细胞发现问题与客服人员沟通的时间证明大于3天的，不重发。