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上海通蔚实业有限公司 主营产品:人白介素试剂盒_大鼠白介素试剂盒_小鼠白介素试剂盒_鸡白介素试剂盒_牛白介素试剂盒_猪白介素试剂盒_羊白介素试剂盒_犬白介素试剂盒_兔白介素试剂盒_猴白介素试剂盒_豚鼠白介素试剂盒_仓鼠白介素试剂盒_鱼白介素试剂盒

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细菌基因组DNA提取试剂盒

价格:¥电议

品牌名称:$brandModel.Title(进口品牌)型号: 原产地:中国大陆 发布时间:2024/10/30 10:53:35更新时间:2024/12/16 15:28:35

产品摘要:细菌基因组DNA提取试剂盒 适用于从细菌中制备高质量的基因组 DNA 。优化的缓冲液体系能迅速裂解 细菌和灭活细胞内核酸酶,然后基因组 DNA 在高盐状态下选择性吸附于硅基质膜上,再 通过快速的漂洗、离心步骤,去除细菌代谢物和蛋白等,*后低盐的洗脱缓冲液将纯净 基因组 DNA 从硅基质膜上洗脱下来。

产品完善度: 访问次数:154

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原代细胞

核酸提取产品

细胞专用培养基

完全培养基

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细胞系

血清

生化检测试剂盒

PCR试剂盒

白介素ELISA试剂盒

详细内容


细菌基因组DNA提取试剂盒

产品特点

本试剂盒适用于从细菌中制备高质量的基因组 DNA 。优化的缓冲液体系能迅速裂解 细菌和灭活细胞内核酸酶,然后基因组 DNA 在高盐状态下选择性吸附于硅基质膜上,再 通过快速的漂洗、离心步骤,去除细菌代谢物和蛋白等,*后低盐的洗脱缓冲液将纯净 基因组 DNA 从硅基质膜上洗脱下来。使用本试剂盒可从过夜培养的细菌培养液中快速提 取高纯度的基因组 DNA 。

它具有下列特点:

1. 简便快速:1 小时内可获得高纯度的基因组 DNA;

2. 质量好:可直接进行 PCR 、酶切和杂交等分子生物学实验。

3. 磁珠法操作,可用于自动化提取。

使用方法

溶菌酶(革兰氏阳性菌用)、溶菌酶缓冲液(20 mM Tris,pH 8.0;2 mM Na2-EDTA; 1.2% Triton X-100)、无水乙醇、RNase A(可选)。

注 意:使用前请先在缓冲液 Buffer W1 和 Buffer W2 中加入无水乙醇,加入体积请参照瓶上的标签)

1. 取 0.5 - 3 ml 过夜培养的菌液,室温 10,000 rpm 离心 1 min ,弃上清。

(注 意:根据菌液的浓度决定取液量,当 OD600=1 时,1ml 菌液浓度为 109 个细胞,菌液的量不要超 过 109 个细胞,太多会使离心柱的膜堵塞,提取的基因组 DNA 的量减少,纯度降低)

2. 加入 200 μl Buffer GTL ,用枪头充分吹打或用涡旋振荡器充分悬浮。

[注 意:对于较难破壁的革兰氏阳性菌,可略过第 2 步骤,加入溶菌酶进行破壁处理,具体方法为:加入 180 ?l 终浓度为 20 mg/ml 的溶菌酶缓冲液(20 mM Tris, pH 8.0;2 mM Na2-EDTA;1.2% Triton X-100;溶菌酶必须用溶菌酶干粉溶解在缓冲液中进行配制,否则会导致溶菌酶无活性) ,37 ℃处理  30 min 以上。如要去除 RNA ,可加入浓度为 100 mg/ml 的 RNase A 4 μl ,室温处理 5 min]

3. 加入 20 μl Proteinase K 溶液,充分混匀。

4. 加入 200 μl Buffer GL,充分混匀,56℃水浴 10 min,孵育过程中每隔一段时间颠倒或 震荡离心管使样本分散均匀。溶液变得清亮后短暂离心,以去除管盖内壁的水珠。

注 意:Buffer GL 加入时可能会产生白色沉淀,一般 56℃时会消失不影响后续实验,如溶液未变清亮,说明细胞裂解不彻底,可能导致提取的DNA量少或者提取的DNA 不纯)

5. 加入 200 μl 无水乙醇,充分震荡,此时可能会出现絮状沉淀,短暂离心以去除管盖内 壁水珠。

6. 将一个离心吸附柱放入收集管中,将上一步所得溶液和絮状沉淀转移到吸附柱中, 12,000 rpm 离心 1 min ,弃收集管中的滤液。

细菌基因组DNA提取试剂盒

7. 向吸附柱内加入 500 μl 的 Buffer W1 ,室温 12,000 rpm 离心 30 sec ,弃收集管中滤液。

注 意:按要求在 Buffer W1 中加入无水乙醇,用后及时盖紧, 以防乙醇挥发)

8. 向吸附柱内加入 600 μl Buffer W2 ,室温 12,000 rpm 离心 30 sec ,弃收集管中废液。

注 意:Buffer W2 为浓缩液,按要求加入无水乙醇,用后及时盖紧, 以防乙醇挥发)

9. 向吸附柱内加入500 μl Buffer W2 ,室温12,000 rpm离心30 sec ,弃收集管中废液。

10. 干燥。将离心吸附柱于 12,000 rpm 离心 2 min ,甩干残留漂洗液。

注 意:此步不能省略,否则残留乙醇会影响基因组 DNA 的后续使用)

11. 将离心吸附柱置于一个新的 1.5 ml 塑料离心管(自备)中,加入 50 - 100 μl Buffer EB, 室温放置 2 min ,12,000 rpm 离心 1 min ,离心管底溶液即基因组 DNA。

注 意:为增加洗脱效率,可将洗脱液 Buffer EB 在 60℃预热。如需使用去离子水洗脱,可用 NaOH   调整其pH 值在7.0 - 8.5 之间,为了增加回收率,可将得到的溶液重新加入到吸附柱中,室温放置2 min, 再次离心收集)

注意事项

1. 如 Buffer GTL 和 Buffer GL 产生沉淀,可在 56℃水浴溶解。

2. 样品应避免反复冻融,否则会导致提取的 DNA 片段小,提取量下降。

3. 所有离心步骤均为台式离心机,室温下操作。

4. 按要求在 Buffer W1 和 Buffer W2 中加入无水乙醇。


细菌基因组DNA提取试剂盒.jpg

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