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动物组织基因组DNA提取试剂盒
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详细内容
动物组织基因组DNA提取试剂盒
本试剂盒适用于动物组织等基因组 DNA 的提取。试剂盒采用了独特的细胞裂解体系降解蛋白,结合硅胶膜特异吸附核酸的原理,可快速纯化得到高质量的基因组DNA。使用本试剂盒得到的基因组 DNA 无蛋白、核酸酶污染,可直接进行PCR、酶切和杂交等相关分子生物学实验。
它具有下列特点:
1. 简便快速,可快速获得高纯度的基因组 DNA;
2. 重复性好,产量高;
3. 完全去除污染物和抑制剂,便于下游应用。
自备试剂
无水乙醇、RNase A(可选)。
(注 意:Buffer W1 和 Buffer W2 为浓缩液,按要求加入无水乙醇,用后及时盖紧,以防乙醇挥发)
1. 称取 20 mg 动物组织(脾组织用量应少 10 mg),先打碎处理为细胞悬液,然后10,000rpm(-11,200×g)离心 1 min,倒尽上清,加 200 μl Buffer GTL,振荡至彻底悬浮。如果没有匀浆仪,也可将组织切成细小碎块,加 200 μl Buffer GTL。
(注 意:如果需要去除 RNA,可加入 4 μl RNase A(100 mg/ml)溶液(客户自备),振荡15 sec,室温放置 5 min。)
2. 加入 20 μl Proteinase K 溶液,充分混匀,在 56℃水浴或金属浴直至组织完全溶解。(注意:不同组织裂解时间不同,通常需 1 - 3 h 即可完成(鼠尾需要消化过夜,不会影响后续操作。)每小时颠倒混合样品 2 - 3 次,用水浴或金属浴振荡器也可)
3. 加入 200 μl Buffer GL,充分混匀,70℃水浴或金属浴处理10 min,期间每隔一段时间震荡离心管,溶液变得清亮后短暂离心,以去除管盖内壁的水珠。
(注 意:Buffer GL 加入时可能会产生白色沉淀,一般 70℃时会消失,不影响后续实验,如溶液未变清亮,说明细胞裂解不彻底,可能导致提取的DNA量少或者提取的DNA不纯)
4. 加入 200 μl 无水乙醇,充分震荡,此时可能会出现絮状沉淀,短暂离心以去除管盖内壁水珠。
5. 将所得溶液和絮状沉淀转移到离心吸附柱中,12,000 rpm 离心30 sec,弃收集管中的滤液。
6. 向吸附柱内加入 500 μl Buffer W1,室温 12,000 rpm 离心30 sec,弃收集管中滤液。(注 意:Buffer W1为浓缩液按要求加入无水乙醇,用后应立即盖紧瓶盖,以防酒精挥发)
7. 向吸附柱内加入 600 μl Buffer W2,室温 12,000 rpm 离心30 sec,弃收集管中滤液。(注 意:Buffer W2为浓缩液,按要求加入无水乙醇,用后应立即盖紧瓶盖以防酒精挥发)
8. 向吸附柱内加入 500 μl Buffer W2,室温 12,000 rpm 离心30 sec,弃收集管中滤液。
9. 干燥。将离心吸附柱于 12,000 rpm 离心 2 min,甩干残留漂洗液。
(注 意:此步不能省略,否则残留乙醇会影响质粒的后续使用)|
10. 将离心吸附柱置于一个新的 1.5 ml 塑料离心管(自备)中,加入50 - 100 μl Buffer EB,室温放置 2 min。12,000 rpm 离心 1 min,离心管底溶液即基因组DNA。
(注 意:为增加洗脱效率,可将洗脱液在 60℃预热。如需使用去离子水洗脱,可用NaOH调整其pH值在 7.0 - 8.5 之间,为了增加基因组 DNA 回收率,可将得到的溶液重新加入到离心管中,室温放置2 min,再次离心收集)
1. 如 Buffer GTL 和 Buffer GL产生沉淀 ,可在 56℃水浴溶解。
2. 样品应避免反复冻融,否则会导致提取的 DNA 片段小,提取量下降。
3. 所有离心步骤均为台式离心机,室温下操作。
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