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上海通蔚实业有限公司 主营产品:人白介素试剂盒_大鼠白介素试剂盒_小鼠白介素试剂盒_鸡白介素试剂盒_牛白介素试剂盒_猪白介素试剂盒_羊白介素试剂盒_犬白介素试剂盒_兔白介素试剂盒_猴白介素试剂盒_豚鼠白介素试剂盒_仓鼠白介素试剂盒_鱼白介素试剂盒

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通用型基因组DNA提取试剂盒

价格:¥电议

品牌名称:$brandModel.Title(进口品牌)型号: 原产地:中国大陆 发布时间:2024/10/30 11:27:34更新时间:2024/10/30 11:27:34

产品摘要:通用型基因组DNA提取试剂盒得分子量为 50kb 的 DNA 片段,纯化过程不需要使用苯酚或等有毒溶剂,无需乙醇沉淀。本试剂盒采用优化的缓冲体系使裂解液中的DNA高效特异的结合到硅基质离心吸附柱上,PCR 和其他酶促反应的抑制剂可通过两步洗涤步骤被有效去除,*后使用低盐缓冲液或水洗脱,即可得到高纯度DNA。

产品完善度: 访问次数:14

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手机网站:http://m.yituig.com/c162640/

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核酸提取产品

细胞专用培养基

完全培养基

细胞库

细胞系

血清

生化检测试剂盒

PCR试剂盒

白介素ELISA试剂盒

详细内容



通用型基因组DNA提取试剂盒

产品特点

本试剂盒适合于从新鲜或冷冻的动物组织,细胞,血液,细菌等多种样品中提取高纯度总 DNA。本品可纯化获得分子量为 50kb 的 DNA 片段,纯化过程不需要使用苯酚或等有毒溶剂,无需乙醇沉淀。本试剂盒采用优化的缓冲体系使裂解液中的DNA高效特异的结合到硅基质离心吸附柱上,PCR 和其他酶促反应的抑制剂可通过两步洗涤步骤被有效去除,*后使用低盐缓冲液或水洗脱,即可得到高纯度DNA。纯化得到的DNA可以直接用于酶切,PCR,Real-Time PCR,文库构建,Southern Blot,

它具有下列特点:

1. 简便快速:1 小时内可获得高纯度的基因组 DNA;

2. 质量好:可直接进行 PCR、酶切和杂交等分子生物学实验。

使用方法

自备试剂

无水乙醇

Enzymatic Lysis Buffer(提取革兰氏阳性菌基因组DNA时须准备)。EnzymaticLysisBuffer 配方:20 mM Tris,pH 8.0;2 mM Na2-EDTA;1.2%Triton X-100;终浓度为20mg/ml的 Lysozyme(溶菌酶)。

一、血液及细胞样本基因组提取

1. 材料处理

1) 如果提取材料为哺乳动物抗凝血液(无核红细胞),可直接向50-200μl 新鲜或冷冻的抗凝血液样品中加入 Buffer GTL 补足至 200μl。

2) 如果提取材料为禽类,鸟类,两栖类或更低级生物的抗凝血液,其红细胞为有核细胞,取 5-10μl 新鲜或冷冻的抗凝血液样品,加入Buffer GTL 补足至200μl。

3) 贴壁培养的细胞应先处理为细胞悬液(提取量为5x106 个细胞),2000rpm(400g)离心 5min,弃尽上清,加 200μl GTL,振荡至样品彻底悬浮。

注 意:如需去除 RNA,可在上述步骤完成后,加入 4μl 浓度为 100mg/ml 的RNase A溶液,涡旋15 秒,室温放置 2min。)

2. 加入 20μl Proteinase K 溶液,混匀。

3. 加入 200μl Buffer GL,涡旋振荡充分混匀,56?C 水浴 10min。

4. 短暂离心以去除管盖内壁的水珠。加入200μl 无水乙醇,涡旋振荡充分混匀,短暂离心。

注 意:加入 Buffer GL 和无水乙醇后要立即涡旋震荡混匀。加入 Buffer GL 和无水乙醇后可能会产生白色沉淀,不会影响后续实验。一些组织在加入 Buffer GL 和无水乙醇后可能形成溶胶状产物,此时推荐进行剧烈震荡或涡旋处理。)

5. 上一个步骤中所得溶液全部加入到已装入收集管的吸附柱(Spin Columns DM)中,若一次不能加完溶液,可分多次转入。12,000 rpm(约 13,400g)离心1min,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。

6. 向吸附柱中加入 500μl Buffer W1(使用前检查是否已加入无水乙醇),12,000rpm离心 1min,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。

7. 向吸附柱中加入 500μl Buffer W2(使用前检查是否已加入无水乙醇),12,000rpm离心 1min,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。

注 意:如需进一步提高 DNA 纯度,可重复步骤 7。)

8. 12,000 rpm 离心 2min,倒掉收集管中废液。将吸附柱置于室温数分钟,以彻底晾干。(注 意:这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除,乙醇的残留会影响后续的酶切、PCR等酶促反应)。

9. 将吸附柱置于一个新的离心管(自备)中,向吸附柱的中间部位悬空加入50-200μlBuffer EB 或灭菌水,室温放置 2-5min,12000rpm离心1min,收集DNA溶液,-20℃保存 DNA。

注 意:为增加洗脱效率,可将洗脱液 Buffer EB 在 60℃预热。如需使用去离子水洗脱,可用NaOH调整其pH值在7.0 - 8.5之间,为了增加回收率,可将得到的溶液重新加入到吸附柱中,室温放置2min,再次离心收集)

通用型基因组DNA提取试剂盒

二、动物组织基因组提取

1. 材料处理如果提取材料为动物组织,取 25 mg(脾组织用量应少于10 mg);如果材料为鼠尾,取一段长度为 0.4-0.6 cm 的大鼠鼠尾或两段长度为 0.4-0.6 cm 的小鼠鼠尾。样本进行液氮研磨或切成小块后置于 1.5 ml 离心管中,加入 180μl Buffer GTL,将不同样品做好标记。若使用匀浆器处理样本,匀浆前向样本中加入不超过 80μl Buffer GTL,匀浆后加入100μlBuffer GTL。

注 意:

1)确保各组织的量不要超出推荐范围。

2)组织样本在加入 Buffer GTL 之前用液氮研磨或加入 Buffer GTL 用匀浆器匀浆处理,可以增加裂解效率。)

2. 加入 20μl Proteinase K,涡旋震荡使样品彻底混匀。56℃水浴,直至组织完全裂解,孵育过程中可每隔一段时间颠倒或震荡离心管使样品分散。

注 意:

1)不同组织消化时间不同,通常 1-3 小时即可完成,鼠尾需要消化6-8 小时,必要时过夜消化,不会影响后续操作。

2)如果孵育和涡旋震荡后仍然有胶状物质,延长56?C 孵育时间或再加入20μl Proteinase K 消化。

3)如需去除 RNA,可在上述步骤完成后,加入4μl 的浓度为100mg/ml 的RNase A 溶液,涡旋 15 秒,室温放置 5-10min。)

3. 加入 200μl Buffer GL,涡旋震荡充分混匀,70?C 水浴 10min。短暂离心后加入200μl无水乙醇,涡旋震荡充分混匀。

注 意:

1)加入 Buffer GL 和无水乙醇后要立即涡旋震荡混匀。

2)加入 Buffer GL 和无水乙醇后可能会产生白色沉淀,不会影响后续实验。一些组织(如脾,肺)在加入 Buffer GL 和无水乙醇后可能形成溶胶状产物,此时推荐进行剧烈震荡或涡旋处理。)

4. 短暂离心,将步骤 3 所得溶液全部加入到已装入收集管的吸附柱(Spin Columns DM)中,若一次不能加完溶液,可分多次转入。12,000 rpm(约13,400g)离心1min,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。

5. 向吸附柱中加入 500μl Buffer W1(使用前检查是否已加入无水乙醇),12,000rpm离心 1 min,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。

6. 向吸附柱中加入 500μl Buffer W2(使用前检查是否已加入无水乙醇),12,000rpm。离心 1min,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。

注 意:如需进一步提高 DNA 纯度,可重复步骤) 

7. 12,000 rpm 离心 2min,倒掉收集管中废液。将吸附柱置于室温数分钟,以彻底晾干。(注 意:这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除,乙醇的残留会影响后续的酶切,PCR等酶促反应)。

8. 将吸附柱置于一个新的离心管(自备)中,向吸附柱的中间部位悬空加入50-200μlBuffer EB 或灭菌水,室温放置 2-5min,12,000 rpm离心1min,收集DNA溶液,-20℃保存 DNA。

注 意:为增加洗脱效率,可将洗脱液 Buffer EB 在 60℃预热。如需使用去离子水洗脱,可用NaOH调整其pH值在7.0 - 8.5之间,为了增加回收率,可将得到的溶液重新加入到吸附柱中,室温放置2min,再次离心收集)

三、细菌基因组提取

1. 细菌样本预处理取 1 - 3 ml 过夜培养的菌液,室温 10,000 rpm 离心 1 min,弃上清。(注 意:根据菌液的浓度决定取液量,当 OD600=1 时,1ml 菌液浓度为 109 个细胞,菌液的量不要超过 109 个细胞,太多会使离心柱的膜堵塞,提取的基因组 DNA 的量减少,纯度降低)

2. 加入 200μl Buffer GTL,用枪头充分吹打或用涡旋振荡器充分悬浮。

注 意:对于较难破壁的革兰氏阳性菌,可略过第 2 步骤,加入溶菌酶进行破壁处理,具体方法为:加入 180 ?l 终浓度为 20 mg/ml 的溶菌酶缓冲液(20 mM Tris, pH 8.0;2 mM Na2-EDTA;1.2%TritonX-100;溶菌酶必须用溶菌酶干粉溶解在缓冲液中进行配制,否则会导致溶菌酶无活性),37 ℃处理30 min 以上。如要去除 RNA,可加入浓度为 100 mg/ml 的 RNase A 4μl,室温处理5 min)

3. 加入 20μl Proteinase K 溶液,充分混匀。

4. 加入 200μl Buffer GL,充分混匀,56℃水浴 10 min,孵育过程中每隔一段时间颠倒或震荡离心管使样本分散均匀。溶液变得清亮后短暂离心,以去除管盖内壁的水珠。(注意:Buffer GL 加入时可能会产生白色沉淀,一般 56℃时会消失,不影响后续实验,如溶液未变清亮,说明细胞裂解不彻底,可能导致提取的 DNA 量少或者提取的 DNA 不纯

5. 加入 200μl 无水乙醇,充分震荡,此时可能会出现絮状沉淀,短暂离心以去除管盖内壁水珠。

6. 将一个离心吸附柱放入收集管中,将上一步所得溶液和絮状沉淀转移到吸附柱中,12,000 rpm 离心 1 min,弃收集管中的滤液。

7. 向吸附柱中加入 500μl Buffer W1(使用前检查是否已加入无水乙醇),12,000rpm离心 1min,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。

8. 向吸附柱中加入 500μl Buffer W2(使用前检查是否已加入无水乙醇),12,000rpm。离心 1min,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。(注意:如需进一步提高 DNA 纯度,可重复步骤 6。)

9. 12,000 rpm 离心 2min,倒掉收集管中废液。将吸附柱置于室温数分钟,以彻底晾干。

注 意:这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除,乙醇的残留会影响后续的酶切、PCR等酶促反应)。

10. 将离心吸附柱置于一个新的 1.5 ml 塑料离心管(自备)中,加入50 - 100μl Buffer GE,室温放置 2 min,12,000 rpm 离心 1 min,离心管底溶液即基因组DNA。

注 意:为增加洗脱效率,可将洗脱液 Buffer EB 在 60℃预热。如需使用去离子水洗脱,可用NaOH 调整其pH值在7.0 - 8.5 之间,为了增加回收率,可将得到的溶液重新加入到吸附柱中,室温放置 2 min,再次离心收集)

注意事项

1. 如 Buffer GTL 和 Buffer GL 产生沉淀,可在 56℃水浴溶解。

2. 样品应避免反复冻融,否则会导致提取的 DNA 片段小,提取量下降。

3. 所有离心步骤均为台式离心机,室温下操作。

4. 按要求在 Buffer W1 和 Buffer W2 中加入无水乙醇。


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