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磁珠法DNA产物纯化试剂盒
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详细内容
磁珠法DNA产物纯化试剂盒
本试剂盒适用于从PCR或酶切产物中回收DNA。含有目的片段的溶液加入DNA结合液中,在合适的条件下,DNA 可特异地结合到磁珠上,通过清洗液的清洗可去除杂质,在低盐、高 pH 条件下洗脱,*后得到纯度较高的DNA。该试剂盒操作简便,质量稳定,得率高,得到的 DNA 可用于酶切、连接、测序、PCR模板等后续的实验。
它具有下列特点:
1. 快速:步骤少,操作简便;
2. 高效:10 μl 磁珠可吸附 10 μg 以上的 DNA 片段,回收效率在80%以上。
1. 估计 PCR 反应液或酶切反应液的体积,向其中加入等体积溶液Buffer GN,充分混匀(无需去除石蜡油或矿物油)。加入等体积的异丙醇混匀,再加入10μl 磁珠混匀5min。
(注 意:对于回收小于 150bp 的小片段可将溶液 Buffer GN 的体积增加到3 倍以提高回收率;溶液混匀后应呈现黄色。如果溶液的颜色为桔红色或紫色,请使用 10 μl 3M 乙酸钠(pH 5.0)将溶液的颜色调为黄色后再进行后续操作。)
2. 将离心管置于磁力架上静置 1 min,磁珠完全吸附后,吸去液体。
3. 将离心管从磁力架上取下,加 600 μl Buffer W2,旋涡充分混匀30 s。
(注 意:Buffer W2 在使用前按要求加入无水乙醇,用后应立即盖紧瓶盖,以防乙醇挥发)
4. 将离心管置于磁力架上静置 1 min,磁珠完全吸附后,吸去液体。
5. 将离心管置于磁力架上,开盖室温放置 5-10min。
(注 意:乙醇残留会抑制后续的酶反应,所以晾干时要确保乙醇挥发干净。但也不要干燥过度,以免DNA 难以洗脱)
6. 将离心管从磁力架上取下,加入 30 - 50 μl Buffer EB,充分震荡1-2 min。
7. 将离心管置于磁力架上静置 1 min,磁珠完全吸附后,小心将溶液转移至新的离心管中,并于适当条件保存。
(注 意:为增加洗脱效率,可将洗脱液在 60℃预热。如需使用去离子水洗脱,可用NaOH调整其pH值在 7.0 - 8.5 之间)
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