2×PfuPCRMasterMix(含染料)

产品特点

本产品包含 Pfu DNA 聚合酶、dNTPs、MgCl2、反应缓冲液、PCR 的增强剂和优化剂以及稳定剂，浓度为 2 ×。具有快速简便、灵敏度高、特异性强、稳定性好等优点，可限度的减少人为误差。适用于高保真 PCR、复杂模板如GC 含量高（>60%），有二级结构的扩增和大规模基因检测。

它具有下列特点：

1. 显著提高 PCR 的特异性和灵敏度；

2. 多次冻融或长期放于 4℃不会影响活性；

3. 快速简便，大大降低劳动强度和取样误差，而且加入了高性能的PCR增强剂和优化剂，降低了对 PCR 条件的要求；

4. 分含染料和不含染料两种体系。含染料的 MasterMix 产品在PCR结束后可以直接电泳，无需加入上样缓冲液。

使用方法

（注 意：以下举例为常规PCR体系和反应条件，实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的调整和优化）

1. PCR体系 

推荐反应体系(20μl)

（注 意：引物浓度请以终浓度 0.1 - 1.0 uM 作为设定范围的参考。扩增效率不高的情况下，可提高引物的浓度；发生非特异性反应时，可降低引物浓度，由此优化反应体系）

2. PCR程序

　注 意：    

A 一般实验中退火温度比扩增引物的熔解温度 Tm 低 5℃，无法得到理想的扩增效率时，适当降低退火温度；发生非特异性反应时，提高退火温度，由此优化反应条件。

B 延伸时间应根据所扩增片段大小设定，Pfu DNA Polymerase 的扩增效率为1 kb/min。

C 可根据扩增产物的下游应用设定循环数。如果循环次数太少，扩增量不足；如果循环次数太多，错配机率会增加，非特异性背景严重。所以，在保证产物得率的前提下，应尽量减少循环次数）

2×PfuPCRMasterMix(含染料)

3. 结果检测

反应结束后取5μl反应产物，加入适量上样缓冲液（含染料的不用加），然后进行琼脂糖凝胶电泳检测。