2×Fast HiFi PCR MasterMix(不含染料)

产品特点

本产品包含超快速高保真 Pfu DNA 聚合酶，扩增速度大约是普通Pfu DNA聚合酶的10-20 倍，是 Taq DNA 聚合酶的 2-6 倍，不仅缩短了延伸时间，而且提高了酶的扩增性能，使其能够在更短的时间里扩增更长的模板。含有 dNTPs、MgCl2、反应缓冲液、PCR反应增强剂、优化剂以及稳定剂，浓度为 2×。具有快速简便、灵敏度高、特异性强、稳定性好等优点，可限度地减少人为误差。

它具有下列特点：

1. 扩增速度快，5-10s/kb，保真性高；

2. 多次冻融或长期放于 4℃不会影响活性；

3. 应用简便，减少误差，降低了对 PCR 条件的要求；

4. 含染料的 MasterMix 产品在 PCR 结束后可以直接上样电泳。

使用方法

（注 意：以下举例为常规PCR体系和反应条件，实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的调整和优化）

1. PCR体系 

（注 意：引物浓度请以终浓度 0.1 - 1.0 uM 作为设定范围的参考。扩增效率不高的情况下，可提高引物的浓度；发生非特异性反应时，可降低引物浓度，由此优化反应体系）

2. PCR程序

注 意：    

Ａ：扩增> 5 kb 的产物时，建议使用 95℃ 5 min 预变性处理。

B-1：退火温度：*适 Tm 与引物间的平均温度相近，若引物间 Tm 值偏差较大，*适Tm用引物的 Tm+1-2℃）。

B-2：退火时间：对于含兼并引物、复杂模板的扩增，建议退火时间延长至30s。c：适合的延伸温度：68-75℃；推荐的延伸速度：10-15 s/kb；质粒等简单模板：5-10 s/kb；常规基因组模板：10-15 s/kb；复杂模板、脏模板：15-25 s/kb；略微增加延伸时间（5-10 s/kb）有利于提高低浓度、复杂模板 PCR 的产量，但总延伸时间不超过30s/kb）。

2×Fast HiFi PCR MasterMix(不含染料)

3. 结果检测

反应结束后取5μl反应产物，加入适量上样缓冲液（含染料的不用加），然后进行琼脂糖凝胶电泳检测。