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MultiplexPCRKit
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详细内容
MultiplexPCRKit
多重 PCR 是指在单个 PCR 反应中同时对多个基因座位进行扩增的PCR技术,操作步骤和普通 PCR 相同,但可同时检测多个片段,在科学研究和疾病诊断等多个领域有重要意义。本试剂盒含有多重 PCR 专用热启动 DNA 聚合酶Multiplex DNAPolymerase,具有极高的扩增特异性和灵敏度。配合针对多重 PCR 反应深度优化的专用缓冲液5×Multiplex Buffer,特别适用于微量样本的多位点检测。
它具有以下特点:
1. 适用范围广,可以高效地完成绝大多数多重 PCR 检测;
2. 扩增稳定,可以程度地减少反应体系优化步骤;
3. 扩增缓冲高度优化,较大程度上抑制非特异性扩增。
4. 单独的镁离子成分,可根据实验需求自行调整。
(注 意:以下举例推荐PCR体系和反应条件,实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的调整和优化)
PCR体系推荐反应体系(20μl)
注 意:
推荐引物反应终浓度为每条引物 0.1 μM,可在 0.05 - 0.4 μM 之间调整。MgCl2终浓度可在 1.0 - 4.0 mM之间调整。
2. PCR 反应程序
注意:
A. 多数情况下,使用默认退火温度即可。如扩增效果不佳,可通过设置退火温度梯度实验来摸索*适退火温度。
B. 预变性时间为 5 min,用于充分释放酶活。请勿降低温度或缩短时间。
C. 对于低拷贝模板、长片段或者扩增片段较多的情况,可延长退火时间至 3 min 以提高扩增效率。
D. 延伸时间以*长片段为准设定。适度延长延伸时间有助于提高扩增产量且有利于困难模板扩增。延伸时间过长可能会导致非特异性扩增增多。
E. 扩增微量样本时,可通过增加循环数提高扩增产物量。循环数过多可能会导致非特异性扩增增多。
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