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快速高保真DNA聚合酶(突变型)
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详细内容
快速高保真DNA聚合酶(突变型)
快速高保真 DNA 聚合酶(突变型)是从克隆有 Pfu DNA Polymerase 基因的大肠杆菌经诱导表达后分离纯化的,该酶融合了 sso7d 序列,该酶在保证高保真性前提下,大大增强扩增的速度。
在 PCR 反应中,该酶延伸速度为 1 kb/10-15s,较适合小于2kb以下片段的扩增,具有 5’-3’DNA 聚合酶活性和 3’-5’外切核酸酶活性,产物3’端不带A,不能直接用 TA 载体克隆。
一般用于 DNA 片段的 PCR 扩增、DNA 标记、引物延伸、序列测定等,产物不能直接用于 T/A 载体克隆。
注 意:以下举例为常规PCR反应体系和反应条件,实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的调整和优化)
1. PCR 体系:
推荐体系(50μl)
注 意:
a 一般实验中退火温度比扩增引物的熔解温度 Tm 相当,无法得到理想的扩增效率时,适当降低退火温度;发生非特异性反应时,提高退火温度,由此优化反应条件。
3. 结果检测:
反应结束后取 5 μl 反应产物,加入适量上样缓冲液后进行琼脂糖凝胶电泳检测。