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一步法RT-PCR扩增试剂盒(去除基因组)

价格:¥电议

品牌名称:$brandModel.Title(进口品牌)型号: 原产地:中国大陆 发布时间:2024/10/31 14:35:31更新时间:2024/12/16 15:28:35

产品摘要: 一步法RT-PCR扩增试剂盒(去除基因组) 专为一步法 RT-PCR 实验研制,去除基因组DNA、逆转录和PCR在一反应体系中进行,反应过程中无需添加试剂,无需打开管盖,在避免污染的同时提高了检测灵敏度和实验效率。

产品完善度: 访问次数:152

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商铺地址:http://www.tw-reagent.com

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生化检测试剂盒

PCR试剂盒

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详细内容

 

一步法RT-PCR扩增试剂盒(去除基因组)

产品特点

1.本试剂盒是专为一步法 RT-PCR 实验研制,去除基因组DNA、逆转录和PCR在一反应体系中进行,反应过程中无需添加试剂,无需打开管盖,在避免污染的同时提高了检测灵敏度和实验效率。

2.本试剂盒包括极其灵敏的去除基因组DNA 的酶,可在瞬间彻底清除残留的基因组还有全新高效逆转录酶、快速热启动 DNA 聚合酶,同时包含适用于逆转录和 PCR 扩增的反应缓冲液和实验中所必需的其它组分。SuperRT 逆转录酶RNaseH活性缺失,减少了逆转录反应中 RNA 的降解。该逆转酶逆转录效率高,可对少量RNA模板进行良好的逆转录反应。

3.PCR反应使用的快速热启动DNA聚合酶具有扩增效率高、特异性强、延伸速度快的优良性能。独特的缓冲体系使逆转录酶和聚合酶同时发挥功效。使用本试剂盒扩增得到的目的产物 3′端附有一个″A″碱基,可直接用于T/A克隆。

保存条件

长期保存,请置于-20℃,有效期 12 个月。使用后请及时放入-20℃保存以保证酶

的活性。

使用方法

1.将 RNA 模板、引物、2×OneStep RT-PCR Mix(with gDNase)和RNase-Free 

Water 溶解并置于冰上备用。

2. 按下表加入试剂,至终体积 20 μl:

注 意:

引物浓度请以终浓度 0.1-1.0μM作为设定范围的参考。扩增效率不高的情           况下,可提高引物的浓度;发生非特异性反应时,可降低引物浓度,由此优化反应体系。3. 涡旋震荡混匀,短暂离心,将溶液收集到管底。

4. 设置反应程序,将 PCR 管置于热循环仪中,进行 RT-PCR 反应。

一步法RT-PCR扩增试剂盒(去除基因组)

反应条件:

注 意:

A. 一般 PCR 实验中退火温度比扩增引物的熔解温度 Tm 低 5℃,退火时间一般为20-30 秒,无法得到理想的扩增效率时,适当降低退火温度;发生非特异性反应时,提高退火温度,由此优化反应条件。

B. 延伸时间根据扩增的片段大小设定,本产品中包含的 DNA Polymerase扩增效率为1 kb/30s。

C. 可根据扩增产物的下游应用设定循环数。循环次数太少,扩增量不足;循环次数多,错配机率会增加,非特异性背景严重。所以,在保证产物得率的前提下,应尽量减少循环次数)

5. 反应结束后取 5 μl 反应产物,加入适量上样缓冲液后进行电泳检测结果。

注意事项

1. 在操作过程中应避免 RNase 污染,防止 RNA 降解或实验中的交叉污染,建议在专门的区域进行 RNA 操作,使用专门的仪器和耗材,操作人员带口罩和一次性手套并经常更换手套。? 

2. 实验尽量使用一次性塑料器皿,若使用玻璃器皿,应使用 0.1%DEPC(焦碳酸二乙酯)水溶液在 37℃处理 12 小时,并在 120℃下高压灭菌 30 分钟后使用,或者将玻璃器皿在180℃下干热灭菌 60 分钟后使用。实验中用到的无菌水应使用0.1%的DEPC处理后进行高压灭菌。? 

3.本试剂使用前请上下颠倒轻轻混匀,尽量避免起泡,并经短暂离心后使用。使用后应尽快放回-20℃,避免反复冻融。

4.本试剂盒必须使用特异性引物,引物的选择可根据具体实验来选择,引物设计的好坏直接影响到 RT-PCR 反应的结果,设计引物时需考虑 GC 含量,引物长度,引物位置,PCR产物的二级结构等因素,建议采用专业的引物设计软件来设计。


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