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犬细小病毒(CPV)核酸检测试剂盒(荧光 PCR 探针法)
点击次数：507发布时间：2022/8/24
犬细小病毒(CPV)核酸检测试剂盒(荧光 PCR 探针法)
【产品名称】 犬细小病毒(CPV)核酸检测试剂盒(荧光 PCR 探针法)
【包装规格】
50T/盒
【货号】
31015Q
【预期用途】
犬细小病毒(Canine Parvovirus，CPV)属细小病毒科，细小病毒属。犬是主要的自然宿主，其他犬科动物，如郊狼、丛林犬、食蟹狐和鬣狗等也可以感染。随着病毒抗
原漂移，病毒已经可以感染猫、小熊、貉等动物。病犬是主要传染源，呕吐物，唾液，粪便中均有大量病毒。
本试剂盒适用于检测疑似感染犬的血液，呕吐物，唾液，粪便等标本中犬细小病毒 DNA，适用于犬细小病毒感染的辅助诊断，其检测结果仅供参考。本产品不提供活
体样品做阳性对照，仅提供人工合成的特异性 DNA 片段标准品作为阳性对照，仅限于业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗用途。
【检验原理】
本试剂盒采用 TaqMan 探针法实时荧光 PCR 技术，针对犬细小病毒的基因高度保守区域设计特异性引物，结合一条特异性探针，用荧光 PCR 技术对犬细小病毒的核酸
进行体外扩增检测，在反应体系中含犬细小病毒核酸模板的情况下，PCR 反应得以进行并释放荧光信号，利用仪器对 PCR 过程中相应通道的信号强度进行实时监测和输出，
实现检测结果的定性、定量分析。
【试剂组成】
名
称
规
格
CPV 扩增液
25 μL×1 管
CPV 反应液
975 uL×1 管
CPV 阳性质控品
50 μL×1 管
阴性质控品
50 μL×1 管
说明书
1 份
说明：1）不同批号的试剂盒组分不可交互使用。2）试剂盒内各试剂组份足够包装规格所标示的检测次数。
3）自备：无 DNA/RNA 酶的 1.5mL 离心管，0.2mL PCR 反应管，滤芯吸头(规格:10μL，200μL，1000μL)，离心机，振荡混合器，各种规格的移液器。
【储存条件及有效期】
-20℃±5℃，避光保存、运输、反复冻融少于 7 次，有效期 12 个月。
【适用仪器】
ABI 、安捷伦 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、eppendorf 等系列荧光定量 PCR 检测仪。
【标本采集】
1. 取出干净拭子，用细胞保存液/生理盐水润湿拭子头，分别在咽喉部、鼻孔和眼部擦拭取样，也可以取活体呕吐物，粪便等样本进行测试。
2. 应避免样本间交叉污染，样本采集后应及时检测，也可保存于-20±5℃待检，长期保存应置于-70℃以下。
【保存和运输】
上述标本短期内可保存于-20℃，长期保存可置-70℃，但不能超过 6 个月，标本运送应采用 2~8℃冰袋运输，严禁反复冻融。
【使用方法】
1. 样品处理（样本处理区）
1.1 样品处理
1）采集应禁食 1 小时，避免取到食物残渣，在口腔内壁两侧各刮取 10-20 下，采取口咽拭子，然后将拭子置于细胞保存液中充分润洗；
2）取出拭子再取鼻腔样本，然后将拭子置于细胞保存液中充分润洗；
3）取出拭子再取眼结膜分泌物，然后将拭子置于细胞保存液中充分润洗；
按照废弃物处理要求丢弃拭子，盖紧管盖，上下颠倒混匀，12000rmp 离心 1min，取上清液进行提取。
1.2 DNA 提取
根据您实验室的具体情况和样品类型，选择适当的提取策略方法。为了使实验结果稳定、有效、可靠，我们建议使用商品化的试剂盒进行提取，严格按照对应试剂盒说明
书进行操作，样本核酸提取过程中应避免污染，提取好的模板样品如不能立即检测，建议-15℃以下保存。
2. 试剂配制（试剂准备区）
2.1 从-15℃以下冰箱中取出试剂盒平衡到室温（20～25℃），注意避免强光照射，待完全溶解后振荡混匀并低速离心 10 s，使用低吸附吸头分液取样，避免试剂损失和
浪费。
2.2 根据待检测样本总数，设所需要的 PCR 反应管管数为 N(N=样本数+1 管阴性对照+1 管阳性对照；样品每满 7 份，多配制 1 份)，每测试反应体系配制如下表：
试剂
CPV 反应液
CPV 扩增液
用量（样本数为 N）
19.5 μL
0.5 μL
2.3 在适当容积的无菌离心管中加入上述试剂，充分振荡混匀后 2000 rpm 离心 10 s，按照 20 μL/管分装量将试剂分装至八联 PCR 反应管中。
2.4 盖紧八联 PCR 反应管盖, 并注意做好相应标识（请标记在八联 PCR 反应管盖两端突出部位，切勿标记在八联 PCR 反应管盖中间，以免影响信号采集）。将 PCR 反应
管转移至样本准备区，剩余试剂放回-15℃以下冰箱冷冻保存。
3. 加样（样本处理区）
将步骤 1 提取的 DNA、阳性质控品、阴性质控品各取 5μL，加入相应的反应管中，盖好管盖，混匀，短暂离心，核酸加样过程中应避免污染。
4. PCR 扩增（核酸扩增区）
4.1 将待检测反应管置于荧光定量 PCR 仪反应槽内；第 2 页 共 2 页
For Research Use Only
4.2 设置好通道、样品信息，反应体系设置为 25μL；
荧光通道选择：检测通道选择 FAM， 淬灭通道选择 NONE，参比荧光选 NONE。
4.3 推荐循环参数设置：
步骤
循环数
温度
时间
收集荧光信号
1
1 cycle
95℃
3min
否
2
40 cycles
95℃
15sec
否
55℃
30sec
是
5. 结果分析判定
5.1 结果分析条件设定
设置 Baseline 和 Threshold：一般直接按机器自动分析的结果分析，当曲线出现整体倾斜时，根据分析后图像调节 Baseline 的 start 值(一般可在 3~15 范围内
调节)、s 值(一般可在 5~20 范围内调节)，以及 Threshold 的 Value 值(上下拖动阈值线至高于阴性对照)，重新分析结果。
5.2 结果判断
阳性：检测通道 Ct 值≤35.0，且曲线有明显的指数增长曲线。
可疑：检测通道 Ct 值>35.0，且出现典型扩增曲线的样本建议重复试验，重复试验结果出现 Ct 值≤38.0 和典型扩增曲线者为阳性，否则为阴性。
阴性：样本检测结果无 Ct 值且无明显的扩增曲线。
6. 质控标准
阴性质控品：无明显扩增曲线或无 Ct 值显示；
阳性质控品：扩增曲线有明显指数生长期，且 Ct 值≤30；
以上条件应同时满足，否则实验视为无效。
7. 检测方法的局限性
样本检测结果与样本收集、处理、运送以及保存质量有关；
样本提取过程中没有控制好交叉污染，会出现假阳性结果；
阳性对照、扩增产物泄漏，会导致假阳性结果；
病原体在流行过程中基因突变、重组，会导致假阴性结果；
不同的提取方法存在提取效率差异，会导致假阴性结果；
试剂运输，保存不当或试剂配制不准确引起的试剂检测效能下降，出现假阴性或定量检测不准确的结果；
本检测结果仅供参考，如须确诊请结合临床症状以及其他检测手段。
8. 【注意事项】
所有操作严格按照说明书进行；
试剂盒内各种组分使用应自然融化，完全混匀并短暂离心；
反应液应避光保存；
反应中尽量避免气泡存在，管盖需盖紧；
使用一次性吸头、一次性手套和各区用工作服；
样本处理、试剂配制、加样需在不同区进行，以免交叉污染；
实验完毕后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外灯处理工作台和移液器；
试剂盒里所有物品应视为污染物对待，并按照《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。
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