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超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase,SOD)试剂盒说明书22动态已更新《采购/推荐》
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品牌名称:$brandModel.Title(进口品牌)型号: 原产地:中国大陆 发布时间:2022/8/11 11:43:16更新时间:2024/12/4 15:27:57
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详细内容
货号: CT-C-A500规格:50 管/48 样
超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase,SOD)试剂盒说明书
可见分光光度法
测定意义:
SOD(EC 1.15.1.1)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,催化超氧化物阴离子 发生岐化作用,生成 H2O2 和 O2。SOD 不仅是超氧化物阴离子清除酶,也是 H2O2 主要生成酶,在生物抗氧化系统中具有重要作用。
测定原理:
通过黄嘌呤及黄嘌呤氧化酶反应系统产生超氧阴离子(O2-.),O2-.可还原氮蓝四唑生成蓝色甲臜,后者在 560nm 处有吸收;SOD 可清除 O2-.,从而抑制了甲臜的形成;反应液蓝色越深, 说明 SOD 活性愈低,反之活性越高。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水
试剂的组成和配制:
提取液:60mL×1 瓶,4℃保存; 试剂一:15mL×1 瓶,4℃保存;
试剂二:粉剂×1 瓶,4℃保存,用时加入 27ml 蒸馏水,充分摇匀悬浊液; 试剂三:液体 175μL×1 支,4℃保存;(与蒸馏水 1:1 稀释后再使用)
试剂四:液体 10mL×1 瓶,4℃保存。
粗酶液提取:
1、细菌、细胞或组织样品的制备: 细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104 个):提取液体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 20%或 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次); 8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
2、组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
3、血清(浆)样品:直接检测。
充分混匀,室温静置 30min 后,加入 1mL 玻璃比色皿,560nm 处测定各管吸光值 A。
注意事项:
1、试剂三为酶,不可冷冻,使用时在冰上放置。
2、对照管只需要做一管。
SOD 活性计算:
1、抑制百分率的计算
抑制百分率=(A 对照管-A 测定管) ÷A 对照管× 100%
尽量使样本的抑制百分率在 30-70%范围内。如果计算出来的抑制百分率小于 30%或大于70%,则通常需要调整加样量后重新测定。如果测定出来的抑制百分率偏高,则需将样本用 提取液适当稀释;如果测定出来的抑制百分率偏低,则需重新准备浓度比较高的待测样本。 2、SOD 酶活性单位:在上述黄嘌呤氧化酶藕联反应体系中抑制百分率为 50%时,反应体系 中的SOD 酶活力定义为一个酶活力单位(U/mL)。
3、SOD 酶活性计算:
(1) 血清(浆)SOD 活性(U/mL)=[抑制百分率÷(1-抑制百分率)×V 反总]÷V 样×样本稀释倍数=11.4×抑制百分率÷(1-抑制百分率)×样本稀释倍数
(2) 组织、细菌或培养细胞 SOD 活力计算:
a. 按样本蛋白浓度计算
SOD 活性(U/mg prot)=[抑制百分率÷(1-抑制百分率)×V 反总]÷(V 样×Cpr)×样本稀释倍数
=11.4×抑制百分率÷(1-抑制百分率)÷Cpr×样本稀释倍数 需要另外测定,建议使用本公司
BCA 蛋白质含量测定试剂盒。
b. 按样本鲜重计算
SOD 活性(U/g 鲜重)=[抑制百分率÷(1-抑制百分率)×V 反总]÷(W×V 样÷V 样总)×样本稀释倍数=11.4×抑制百分率÷(1-抑制百分率)÷W×样本稀释倍数
c. 按细菌或细胞个数计算
SOD 活力(U/104 cell)=[抑制百分率÷(1-抑制百分率) ×V 反总]÷(500×V 样÷V 样总)×样本稀释 倍数=0.0228×抑制百分率÷(1-抑制百分率)×样本稀释倍数
V 反总:反应体系总体积,1.026mL;V 样:加入反应体系中样本体积,0.09mL;V 样总: 加入提取液体积,1 mL;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL ;W:样本质量,g;500:细胞或 细菌总数, 500 万