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技术文章

谷丙转氨酶(GPT)活性测定试剂盒说明书

点击次数:15574 发布时间:2022/7/23 19:59:39

 谷丙转氨酶(GPT)活性测定试剂盒说明书

可见分光光度法

正式测定务必取2-3 个预期差异较大的样本做预测定

产品内容:

提取液:液体30mL×瓶,4℃保存。

试剂一:液体5mL×瓶,4℃保存;

试剂二:液体5mL×瓶,4℃保存;

试剂三:液体50 mL×瓶,4℃保存;

产品说明:

GPTEC 2.6.1.2)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,催化氨基酸和酮酸转氨基反应,在氨基酸代谢中具有重要作用。此外,哺乳动物肝细胞GPT 活性很高,当肝细胞坏死,GPT 释放到血液中,血清GPT 活性显著增高。因此,GPT 被卫生组织推荐为肝功能损害*敏感的检测指标。

GPT 催化丙氨酸和α-酮戊二酸发生转氨基反应,生成丙酮酸和谷氨酸;加入2,4-二硝基苯肼溶液,不仅终止上述反应,而且与酮酸中的羰基加成,生成丙酮酸苯腙;苯腙在碱性条件下呈红棕色,可以在505nm 读取吸光值并计算酶活力。

需自备的仪器和用品

可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1 mL 玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

操作步骤:

一、样品测定的准备

1、 细菌、细胞或组织样品的制备:

细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104 个):提取液体积(mL)为500~1000的比例(建议500 万细菌或细胞加入1mL 提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率20%或200W,超声3s,间隔10s,重复30 次);8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。

组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)15~10 的比例(建议称取约0.1g 组织,加入1mL 提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。

2、 血清(浆)样品:直接检测。

二、测定操作表

1、 分光光度计预热30min 以上,调节波长至505nm,蒸馏水调零。

2、 EP 管中加入下列试剂

 

 

试剂名称(μL

测定管

对照管

待测样本

20

 

试剂一

100

100

混匀后,37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)预热30min

试剂二

100

100

待测样本

 

20

混匀后,37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)准确水浴20min

试剂三

1000

1000

混匀,室温放置10min,在505nm 波长处,测各管吸光度。每个测定管需设一个对照管。

原创作者:上海初态生物科技有限公司

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