企业档案
会员类型:会员
已获得易推广信誉 等级评定
(0 -40)基础信誉积累,可浏览访问
(41-90)良好信誉积累,可接洽商谈
(91+ )优质信誉积累,可持续信赖
易推广会员:3年
最后认证时间:
注册号: 【已认证】
法人代表: 【已认证】
企业类型:经销商 【已认证】
注册资金:人民币32万 【已认证】
产品数:18147
参观次数:1186422
手机网站:http://m.yituig.com/c163960/
旗舰版地址:http://www.shctbio.com
荧光-PCR法
ELISA试剂盒
- 猫ELISA试剂盒
- 斑马ELISA试剂盒
- 蜥蜴ELISA试剂盒
- 鹿ELISA试剂盒
- 类人猿ELISA试剂盒
- 鲸ELISA试剂盒
- 蝌蚪ELISA试剂盒
- 海狮ELISA试剂盒
- 鸽子ELISA试剂盒
- 貂ELISA试剂盒
- 骆驼ELISA试剂盒
- 大象ELISA试剂盒
- 蚯蚓ELISA试剂盒
- 微生物ELISA试剂盒
- 虾ELISA试剂盒
- 裸鼠ELISA试剂盒
- 鱼ELISA试剂盒
- 昆虫ELISA试剂盒
- 绵羊ELISA试剂盒
- 山羊ELISA试剂盒
- 鹅ELISA试剂盒
- 其他ELISA试剂盒
- 农残ELISA试剂盒
- 羊ELISA试剂盒
- 猴ELISA试剂盒
- 兔ELISA试剂盒
- 鸭ELISA试剂盒
- 马ELISA试剂盒
- 牛ELISA试剂盒
- 猪ELISA试剂盒
- 犬ELISA试剂盒
- 仓鼠ELISA试剂盒
- 豚鼠ELISA试剂盒
- 土壤ELISA试剂盒
- 植物ELISA试剂盒
- 小鼠ELISA试剂盒
- 大鼠ELISA试剂盒
- 人ELISA试剂盒
- 鸡ELISA试剂盒
病理染色
缓冲液
抗体(标签抗体、内参抗体、一抗、二抗)
来样检测服务
生化试剂盒
技术文章
实时 PCR 实验2022动态已更新《新品/推荐》
点击次数:15580 发布时间:2022/8/10 23:59:15
材料与仪器
ABIPRISM7700 型号系列检测系统
步骤
1. 缓冲液、溶液和试剂
以 50ul 反应体系为例。
Platinum Quantitative PCR Super Mix-UDG(Invitrogen11730-025) 25ul
ROX 染料(Invitrogen12223012) 1ul
灭菌的蒸馏水(Gibco15230-162) 12ul
10umol/L 反向引物 1ul
10umol/L 正向引物 1ul
小计 40ul
溶于 0.1XTE 或无菌水的模板 10ul
总计 50ul
2. 门的仪器
ABIPRISM7700 型号系列检测系统。
二、方法
1.PCR 温度循环程序
a. 三步循环法
50°C,保持 2 min(消化 UDG)。
95°C, 保持 2 min(使模板变性;使尿嘧啶 DNA 糖基化酶失活;使热启动:Taq 聚合酶活化)。
95°C,15s;55°C,30s;72°C,30s, 进行 45 个循环。
b. 二步循环法
50°C,保持 2 min(消化 UDG)。
95°C,保持 2 min(使模板变性;使尿嘧啶 DNA 糖基化酶失活;使热启动 Taq 聚合酶活化)
95°C,15s;60°C,30s,进行 45 个循环。
2. 解链曲线分析程序
a.PCR 反应的程序:40°C,1min;95°C,19 min;25°C,孵育 2 min。许多实时 PCR 仪器都配有相应的软件,该软件提供有荧光强度与解链温度之间的导数关系曲线。
b. 考虑到反应体系中的离子环境,目的产物的 PCR 只有一个峰值,这才是理想的结果。如果扩增了不止一个产物和/或产生了引物二聚体,就会产生多个峰,当然引物二聚体的解链温度通常比 PCR 目的产物低。所以,解链曲线分析可以迅速有效地、很好地控制定量 PCR 的进程。
c. 用 c-myc 特异 LUX 引物(表 15-1) 进行实时 PCR 的结果见图 15-2[(a) 图见封二彩图]。进行实时定量 PCR 时,先把 c-myc 质粒从 10~107 拷贝的范围内进行系列稀释试剂按上面描述的体系进行混合,使用 SuperMix-UDG(2 卞反应混合物)。结果表明应用LUX 实验平台进行实时定量 PCR 可以进行 100 或更少拷贝的目的基因的扩增,并可以得到 7 个数量的动态曲线。
原创作者:上海初态生物科技有限公司