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维生素B1(Vitamin B1,VB1)试剂盒说明书 可见分光光度法2022已更新

点击次数:15617 发布时间:2022/6/14 18:36:47

维生素B1(Vitamin B1,VB1)试剂盒说明书

可见分光光度法

注意:正式测定之选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义

维生素B1(Vitamin B1)是构成脱羧辅酶的主要成分,参与细胞代谢中的三羧酸循环,是维持机体正常代谢必须的水溶性维生素,在生物体能量代谢中有重要的作用。

测定原理

VB1在碱性条件下还原铁生成亚,亚铁与Fe3+在弱酸条件下生成普鲁士蓝,在704nm有特征吸收峰。

自备实验用品及仪器

天平、研钵、离心机、可见分光光度计、恒温水浴锅、1 mL玻璃比色皿、蒸馏水。

试剂组成和配制

提取液:液体 35mL×1 瓶,4℃保存。

试剂一:液体 1mL×1 瓶,4℃保存。

试剂二:液体 5mL×1 瓶,4℃保存。

试剂三:液体 5mL×1 瓶,4℃避光保存。

试剂四:液体 12mL×1 瓶,4℃保存。

试剂五:液体 6mL×1 瓶,4℃避光保存。

样本处理

1. 组织:将样品磨碎,按照质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g,加入0.6mL提取液)加入提取液,60℃浸提30min,加蒸馏水0.4mL,混匀后于25℃,13000g 离心10min,取上清测定(动物组织等蛋白含量较高的样本建议离心 20-30分钟)。

2. 细胞:按照细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入0.6mL提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3,间隔7,总时间3min);加蒸馏水0.4mL,混匀后于25℃,13000g 离心10min,取上清测定。

3. 血清:直接测定。

测定操作

 

空白管

测定管

样品(μL)

 

0.1

试剂一(μL)

100

 

试剂二(μL)

80

80

试剂三(μL)

100

100

充分混匀,80℃反应 10min

提取液(μL)

80

80

试剂四(μL)

220

220

试剂五(μL)

120

120

H2O(μL)

300

300

充分混匀,静置20min,于1mL玻璃比色皿,蒸馏水调零,测定704nm处吸光值,记为A空白管和A测定管,△A=A测定管-A空白管。


原创作者:上海初态生物科技有限公司

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