夹心法ELISA：

1.  加样：将标准品工作液依次加入到两列孔中，每个浓度的工作液并列加两孔，每孔100 μL。待测样品加入到其他孔，每孔100 μL(若样本浓度高于检测范围，需用标准品&样本稀释液稀释后取样)。给酶标板覆膜，37℃孵育90分钟。提示：加样时将样品加于酶标板底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，避免产生气泡。加样时间宜控制在10分钟内。

2.  生物素化抗体/抗原：弃去液体，甩干，不用洗涤。每个孔中立即加入生物素化抗体/抗原工作液100 μL，混匀，酶标板加上覆膜， 37℃孵育1小时。

3.  洗涤：甩尽孔内液体，每孔加洗涤液350 μL，浸泡1-2分钟，吸去或甩掉酶标板内的液体，在厚的吸水纸上拍干。重复此洗板步骤3次。提示：此处与其他洗板步骤都可用洗板机。每一步洗涤充分是实验的根本。

4.  HRP酶结合物：每孔加酶结合物工作液100 μL，混匀，加上覆膜，37℃孵育30分钟。

5.  洗涤：弃去孔内液体，洗板5次，方法同步骤3。

6.  底物：每孔加底物A，B各50μL加上覆膜，37℃避光孵育15分钟左右。提示：根据实际显色情况酌情缩短或延长孵育时间，但不可超过30分钟。当标准孔出现明显梯度时，即可终止。

7.  终止：每孔加终止液50 μL，终止反应。提示：终止液的加入顺序应尽量与底物溶液的加入顺序相同。

8.  读值：立即用酶标仪在450 nm波长测量各孔的光密度(OD值)。应提打开酶标仪预热，设置好检测程序。

9.   实验完毕后，将未用完的试剂按规定的保存温度放回冰箱保存至保质期。
竞争法ELISA：

1.   加样：将标准品工作液依次加入到两列孔中，每个浓度的工作液并列加两孔，每孔50 μL。待测样品加入到其他孔，每孔50 μL(若样本浓度高于检测范围，需用标准品&样本稀释液稀释后取样)。立即每孔加入配好的生物素化抗体工作液50 μL。混匀，给酶标板覆膜，37℃孵育45分钟。提示：加样时将样品加于酶标板底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，避免产生气泡。加样时间宜控制在10分钟内.，

2. 2.   洗涤：甩尽孔内液体，每孔加洗涤液350 μL，浸泡1-2分钟，吸去或甩掉酶标板内的液体，在厚的吸水纸上拍干。重复此洗板步骤3次。提示：此处与其他洗板步骤都可用洗板机。每一步洗涤充分是实验的根本。

3.   HRP酶结合物：每孔加酶结合物工作液100 μL，混匀，加上覆膜，37℃孵育30分钟。

4.   洗涤：弃去孔内液体，洗板5次，方法同步骤2。

5.  底物：每孔加底物溶液(TMB) 90 μL，混匀，加上覆膜，37℃避光孵育15分钟左右。提示：根据实际显色情况酌情缩短或延长孵育时间，但不可超过30分钟。当标准孔出现明显梯度时，即可终止。

6.   终止：每孔加终止液50 μL，终止反应。提示：终止液的加入顺序应尽量与底物溶液的加入顺序相同。

7.   读值：立即用酶标仪在450 nm波长测量各孔的光密度(OD值)。应提打开酶标仪预热，设置好检测程序。

8.   实验完毕后，将未用完的试剂按规定的保存温度放回冰箱保存至保质期。

上海初态生物:
操作流程:

稀释－－加样－－温育－－配液－－洗涤－－加酶－－温育-洗涤－－显色－－终止－－测定

1.有质量问题免费包换，合同上注明了的(质量问题包括运输不当，客户在使用过程中测不出结果，等等!)

2全程技术指导(包括售的标本收集，使用过程中不明白的地方，实验结束后的数据分析，有任何疑问，我们技术都会即时给你去电

3提供免费代测的服务。(你只需把标本寄过来，我们为你节省时间，帮你出结果，原始数据，分析数据均可提供，一般时间是5天左右)

4客户有任何问题，我们都是在一个工作日之内给出解决方案。售后和技术这一块都是竭诚为客户服务!

ELISA试验时，注意事项如下:

1正式试验时，应分别以阳性对照与阴性对照控制试验条件，待检样品应作一式二份，以保

证实验结果的准确性。有时本底较高，说明有非

特异性反应，可采用羊血清、兔血清或BSA等封闭。

2在ELISA中，进行各项实验条件的选择是

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客服

上海初态生物:

质量保证及售后服务:

一、购买方严格按照包装上注明的贮藏条件贮藏因购货方对产品保管不善而产生的产品质量问题由购货方负责。

二、我司所提供的一切产品，均为科研试剂，仅供科研和实验用。

三、如因运输造成的货物损坏，由供方与运输方协调解决，需方不承担由此产生的损失。因不可抗力因素造成我司延期交货或无法交货的，我司将及时通知买方而不承担任何损失。

四、在质量保证期间内，如有下列情况者，我公司将视情况收取材料费。

1、为依据说明手册上所指示的工程序和环境使用所致的损坏;

2、非我公司技术人员维修所致的损坏;

五、质量保证期从购买之日起，为期半年。本公司产品仅用于科研。