原理

双抗夹心 ELISA 法是指将特异性针对待测抗原的抗体包被于 96 孔微孔板 中，制成固相载体，向微孔中分别加入标准品或标本，其中待测抗原与连接于 固相载体上的抗体结合，然后加入生物素化的针对待测抗原的抗体，形成夹心， 将未结合的生物素化抗体洗净后，加入 HRP 标记的亲和素，再次彻底洗涤后加 入 TMB 底物显色。TMB 在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下 转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中的待测抗原呈正相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度(O.D.值)，用于样本中待测抗原浓度测算。

夹心法ELISA：

1.  加样：将标准品工作液依次加入到两列孔中，每个浓度的工作液并列加两孔，每孔100 μL。待测样品加入到其他孔，每孔100 μL(若样本浓度高于检测范围，需用标准品&样本稀释液稀释后取样)。给酶标板覆膜，37℃孵育90分钟。提示：加样时将样品加于酶标板底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，避免产生气泡。加样时间宜控制在10分钟内。

2.  生物素化抗体/抗原：弃去液体，甩干，不用洗涤。每个孔中立即加入生物素化抗体/抗原工作液100 μL，混匀，酶标板加上覆膜， 37℃孵育1小时。

3.  洗涤：甩尽孔内液体，每孔加洗涤液350 μL，浸泡1-2分钟，吸去或甩掉酶标板内的液体，在厚的吸水纸上拍干。重复此洗板步骤3次。提示：此处与其他洗板步骤都可用洗板机。每一步洗涤充分是实验的根本。

4.  HRP酶结合物：每孔加酶结合物工作液100 μL，混匀，加上覆膜，37℃孵育30分钟。

6.  底物：每孔加底物A，B各50μL加上覆膜，37℃避光孵育15分钟左右。提示：根据实际显色情况酌情缩短或延长孵育时间，但不可超过30分钟。当标准孔出现明显梯度时，即可终止。

7.  终止：每孔加终止液50 μL，终止反应。提示：终止液的加入顺序应尽量与底物溶液的加入顺序相同。

8.  读值：立即用酶标仪在450 nm波长测量各孔的光密度(OD值)。应提打开酶标仪预热，设置好检测程序。

9.   实验完毕后，将未用完的试剂按规定的保存温度放回冰箱保存至保质期。

结果判断

 1.  试验有效性：阳性对照孔OD值平均值≥1.00；

                阴性对照孔OD值平均值≤0.15。

2.  临界值（Cut off）计算：临界值=阴性对照孔平均值+0.15

3.  阴性判断：样品OD值＜临界值（Cut off），样品为阴性

4.  阳性判断：样品OD值＞临界值（Cut off），样品为阳性

【注意事项】

1、试剂盒置2℃～8℃保存。

2、使用试剂应摇匀，并弃去1～2滴后垂直滴加。

3、从冷藏环境中取出试剂盒内全部瓶装试剂及待测标本所需微孔条，置室温平衡30分钟后再行测试，余者应及时封存于冰箱中以备后用。

4、待测标本不可用NaN3防腐。

5、不同批号试剂请勿通用。

6、结果判断须在10分钟内完成。

7、若浓缩洗涤液出现结晶时，请置37℃至溶解。

试剂盒组成

初态生物是一家集科学研究、生产，技术服务，实验文化传播于一体的集团化企业，总部落于上海，我们严守标准，履行合同，工程优质，我们秉承“追求顾客满意度，追求员工满意度，追求市场满意度”我们致力于各种ELISA试剂盒、抗体、生物试剂等优质科研产品的研发、销售，免费为您提供全程技术指导，解决您的后顾之忧。企业微信：15901879664

质量保证及售后服务:

一、购买方严格按照包装上注明的贮藏条件贮藏因购货方对产品保管不善而产生的产品质量问题由购货方负责。

二、特别提示：本店出售的均为实验试剂，严禁用于一切与人体有关的域。如使用试剂盒不当对于人体应用所造成的任何后果，均由买家自己负责！

三、如因运输造成的货物损坏，由供方与运输方协调解决，需方不承担由此产生的损失。因不可抗力因素造成我司延期交货或无法交货的，我司将及时通知买方而不承担任何损失。

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1、为依据说明手册上所指示的工程序和环境使用所致的损坏;

2、非我公司技术人员维修所致的损坏;

五、质量保证期从购买之日起，为期半年。本公司产品仅用于科研。为客户服务!

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