产品名称：兔子Ⅲ型胶原氨基端肽(PⅢNT)ELISA试剂盒

保存条件：2-8度

供应商：初态生物

保质期：6个月

性状：液体

可测样本数48T:多可测样本42个96T：多可测样本90个

研究域：新陈代谢、信号传导、免疫学、细胞生物学、肿瘤、神经生物学等相关域的生命科学研究。                                                                                                                                  

供应的种属有：人、大鼠、小鼠、豚鼠、兔子、猪犬、牛羊、鸡鸭、植物ELISA试剂盒等

检测波长:450 nm

标本：血清、血浆、尿液、胸腹水、灌洗液、脑脊液、心房水、细胞培养上清、组织匀浆等标本 

试剂盒性能:特异性强、重复性好、稳定性高、超灵敏度

原理

双抗夹心 ELISA 法是指将特异性针对待测抗原的抗体包被于 96 孔微孔板 中，制成固相载体，向微孔中分别加入标准品或标本，其中待测抗原与连接于 固相载体上的抗体结合，然后加入生物素化的针对待测抗原的抗体，形成夹心， 将未结合的生物素化抗体洗净后，加入 HRP 标记的亲和素，再次彻底洗涤后加 入 TMB 底物显色。TMB 在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下 转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中的待测抗原呈正相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度(O.D.值)，用于样本中待测抗原浓度测算。

夹心法ELISA：

1.  加样：将标准品工作液依次加入到两列孔中，每个浓度的工作液并列加两孔，每孔100 μL。待测样品加入到其他孔，每孔100 μL(若样本浓度高于检测范围，需用标准品&样本稀释液稀释后取样)。给酶标板覆膜，37℃孵育90分钟。提示：加样时将样品加于酶标板底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，避免产生气泡。加样时间宜控制在10分钟内。

2.  生物素化抗体/抗原：弃去液体，甩干，不用洗涤。每个孔中立即加入生物素化抗体/抗原工作液100 μL，混匀，酶标板加上覆膜， 37℃孵育1小时。

3.  洗涤：甩尽孔内液体，每孔加洗涤液350 μL，浸泡1-2分钟，吸去或甩掉酶标板内的液体，在厚的吸水纸上拍干。重复此洗板步骤3次。提示：此处与其他洗板步骤都可用洗板机。每一步洗涤充分是实验的根本。

4.  HRP酶结合物：每孔加酶结合物工作液100 μL，混匀，加上覆膜，37℃孵育30分钟。

6.  底物：每孔加底物A，B各50μL加上覆膜，37℃避光孵育15分钟左右。提示：根据实际显色情况酌情缩短或延长孵育时间，但不可超过30分钟。当标准孔出现明显梯度时，即可终止。

7.  终止：每孔加终止液50 μL，终止反应。提示：终止液的加入顺序应尽量与底物溶液的加入顺序相同。

8.  读值：立即用酶标仪在450 nm波长测量各孔的光密度(OD值)。应提打开酶标仪预热，设置好检测程序。

9.   实验完毕后，将未用完的试剂按规定的保存温度放回冰箱保存至保质期。

结果判断

 1.  试验有效性：阳性对照孔OD值平均值≥1.00；

                阴性对照孔OD值平均值≤0.15。

2.  临界值（Cut off）计算：临界值=阴性对照孔平均值+0.15

3.  阴性判断：样品OD值＜临界值（Cut off），样品为阴性

4.  阳性判断：样品OD值＞临界值（Cut off），样品为阳性

【注意事项】

1、试剂盒置2℃～8℃保存。

2、使用试剂应摇匀，并弃去1～2滴后垂直滴加。

3、从冷藏环境中取出试剂盒内全部瓶装试剂及待测标本所需微孔条，置室温平衡30分钟后再行测试，余者应及时封存于冰箱中以备后用。

4、待测标本不可用NaN3防腐。

5、不同批号试剂请勿通用。

6、结果判断须在10分钟内完成。

7、若浓缩洗涤液出现结晶时，请置37℃至溶解。

试剂盒组成

初态生物是一家集科学研究、生产，技术服务，实验文化传播于一体的集团化企业，总部落于上海，我们严守标准，履行合同，工程优质，我们秉承“追求顾客满意度，追求员工满意度，追求市场满意度”我们致力于各种ELISA试剂盒、抗体、生物试剂等优质科研产品的研发、销售，免费为您提供全程技术指导，解决您的后顾之忧。企业微信：15901879664

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