检测方法：微量法、可见分光光度法、HPLC法、差速离心法、火焰光度法、荧光法

规格：100管/48样、50管/24样

试验中所需的仪器和试剂：

可见分光光度计/酶标仪、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96 孔板、研钵、冰和蒸馏水。

操作步骤：

一、粗酶液提取：

1. 细菌、细胞或组织样品的制备：

细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104 个）：提取液体积（mL）为500~1000：1 的比例（建议500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液）， 超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20%或200W，超声3s，间隔10s，重复30 次）；8000g 4℃ 离心10min，取上清，置冰上待测。

组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织， 加入1mL 提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

2. 血清（浆）样品：直接检测。

3. 丙酮酸钠标准液：取 100µL 标准液，倍比稀释至 1、0.5、0.25、0.125、0µmol/mL，用2、1、0.5、0.25、0.125、0µmol/mL 做标准曲线。

二、测定操作表：

1. 分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 450nm，蒸馏水调零。

2. 样本测定

充分混匀，37℃（哺乳动物）或 25℃（其它物种）准确水浴 15min

充分混匀，37℃（哺乳动物）或 25℃（其它物种）水浴 15min

充分混匀，室温静置 3min，取200µL 转移至微量玻璃比色皿或在 96 孔板中，450 nm 下测定吸光度，计算∆A=A 测定管-A 对照管。每个测定管需要设一个对照。

根据标准管测定值和浓度做标准曲线，y 为标准品浓度，µmol/mL；x 为对吸光度（减去浓度为0 的标准管的OD 值）。

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