可见分光光度法

产品内容：

提取液：30mL×1瓶， 4℃保存；

试剂一：液体15 mL×1瓶， 4℃保存； 

试剂二：粉剂×1支，-20℃保存，用时加入1.3 mL双蒸水充分溶解备用，配好后-20 ℃保存，可保存两周，禁止反复冻融；

试剂三：液体15 mL×1瓶，4℃保存； 

试剂四：液体50 mL×1瓶，4℃保存；

产品简介：

LDH（EC 1.1.1.27）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，是糖酵解途径的末端酶，催化丙酮酸与乳酸之间的可逆反应，伴随着NAD⁺/NADH之间互变。

LDH催化NAD⁺氧化乳酸生成丙酮酸，丙酮酸进一步与2, 4 - 二硝基苯肼作用生成丙酮酸二硝基苯腙，在碱性溶液中显棕红色，颜色深浅与丙酮酸浓度成正比。

试验中所需的仪器和试剂：

可见分光光度计、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

操作步骤：

一、样品测定的准备：   

1. 细菌或培养细胞：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清，按照细菌或细胞数量（10⁴个）：提取液体积（mL）为500-1000:1 的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次），8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

2. 组织：按照组织质量（g）：提取液体积（mL）为1:5-10 的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

3. 血清（浆）样品：直接检测。

二、测定操作：

1. 分光光度计预热30min以上，调节波长至450nm，蒸馏水调零。

2. 样本测定（在EP管中加入下列试剂）

充分混匀，37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）水浴15min

充分混匀，37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）水浴15min

充分混匀，室温静置3min，450 nm下测定吸光度，计算ΔA=A测定管-A对照管。每个测定管需要设一个对照管。