产品内容：

试剂一、提取液60 mL×1瓶，在4℃保存；

试剂二、液体50 mL×1瓶，在4℃保存；

试剂三、粉剂×2支，-20℃保存；临用加入300μL蒸馏水，用不完的试剂仍-20℃保存；

试剂四、粉剂×2支，-20℃保存；临用加入300μL蒸馏水，用不完的试剂仍-20℃保存。

产品说明：

MDH（EC 1.1.1.37）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，线粒体中MDH 是TCA循环的关键酶，催化苹果酸形成草酰乙酸；相反，胞浆中MDH 催化草酰乙酸形成苹果酸。草酰乙酸是重要的中间产物， 连接多条重要的代谢途径。因此，MDH 在细胞多种生理活动中扮演着重要的角色，包括线粒体的能量代谢、苹果酸-天冬氨酸穿梭系统、活性氧代谢和抗病性等。根据不同的辅酶特异性，MDH 分为NAD-依赖的MDH 和NADP-依赖的MDH，细菌中通常只含有NAD-MDH，在真核细胞中，NAD-MDH 分布于细胞质和线粒体中。

NAD-MDH 催化NADH 还原草酰乙酸生成苹果酸，导致340nm 处光吸收下降。

需自备的仪器和用品：

紫外分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1 mL石英比色皿和蒸馏水。

操作步骤：

一、样本测定的准备：

1、 细菌、细胞或组织样品的制备：

细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（10⁴ 个）：试剂一体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL试剂一），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30 次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10 的比例（建议称取约0.1g 组织，加入1mL 试剂一），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

2、 血清（浆）样品：直接检测。

二、测定步骤：

1、 分光光度计预热30min以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。

2、 将试剂二在37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）水浴10min以上。

3、 操作表：

将上述试剂按顺序加入1 mL石英比色皿中，混匀后立即在340 nm 波长下记录初始吸光度A1 和反应1min后的吸光度A2，计算ΔA=A1-A2。

注意：若A1-A2 大于0.5，需将样本用提取液稀释，使A1-A2 小于0.5，可提高检测灵敏度。计算公式中乘以相应稀释倍数。