单脱氢抗坏血酸还原酶（MDHAR）活性测定试剂盒说明书

微量法

注意：正式测定之选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义：

MDHAR催化MDHA还原生成AsA，在抗坏血酸氧化还原代谢中具有重要作用。

测定原理：

MDHAR催化NADH还原MDHA生成AsA和NAD ⁺，NADH在340nm有特征吸收峰，但是NAD⁺没有。通过测定340nm光吸收下降速率，来计算出MDHAR活性。

实验中所需仪器及设备：

研钵、冰、台式离心机、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、可调式移液枪和双蒸水

试剂组成和配置：

试剂一：液体×1 瓶，4℃保存。

试剂二：液体×1 瓶，室温保存。

试剂三：粉剂×1 瓶（棕色），4℃保存。临用加入3mL蒸馏水充分溶解。

试剂四：粉剂×1 瓶，4℃保存。临用加入2.5mL蒸馏水充分溶解。

试剂五：液体×1 瓶，4℃保存。临用加3mL试剂二充分溶解。

粗酶液提取：

1. 组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约0.1g组织，

加入1mL试剂一）进行冰浴匀浆。8000g，4℃离心10min，取上清置冰上待测。

2. 细菌、真菌：按照细胞数量（10⁴个）：试剂一体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500 万细胞加入1mL试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3，间隔 7，总时间3min）；8000g ，4℃离心20min，取上清液置冰上混匀待测。

3. 血清等液体：直接测定。

MDHAR 测定操作：

1.分光光度计/酶标仪预热30min，调节波长到340nm，蒸馏水调零。

2.试剂二在 25℃水浴锅中预热30min。

3.依次在微量石英比色皿/96孔板中加入20μL试剂三、20μL试剂四、20μL试剂五和120μL试剂二，*后加入20μL上清液，迅速混匀后于340nm比色，记录30s和150s的吸光值30s和150s 的吸光值A1和A2，△A=A1-A2。

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（注：本试剂只用于科研，欢迎来电咨询!）

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