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上海初态生物科技有限公司 主营产品:人elisa试剂盒,大鼠elisa试剂盒,小鼠elisa试剂盒,牛elisa试剂盒,犬elisa试剂盒,鸡elisa试剂盒,鸭elisa试剂盒,山羊elisa试剂盒,豚鼠elisa试剂盒,仓鼠elisa试剂盒,马elisa试剂盒,猴elisa试剂盒,猪elisa试剂盒,兔elisa试剂盒,绵羊elisa试剂盒,农残elisa试剂盒

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人二肽基肽酶 4(DPP4) 酶联免疫吸附测定试剂盒

价格:¥电议

品牌名称:$brandModel.Title(进口品牌)型号: 原产地:中国大陆 发布时间:2024/3/28 15:32:59更新时间:2024/3/28 15:32:59

产品摘要:本试剂盒用于体外定量检测血清、血浆、组织匀浆及相关液体样本中人二肽基肽酶 4(DPP4)的活性。

产品完善度: 访问次数:164

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详细内容

 
备注
1. 96T/48T)打开包装后请及时检查所有物品是否齐全。
2. 标准品浓度依次为:3201608040200 U/L
3. 经过大量正常标本检验,标本的正常浓度值均在试剂盒提
供的检测范围内,实验过程中直接取 50μL 样本上样即可。
当有部分样本值超过大标准品浓度时,可用样本稀释液
将标本进行适当稀释后再进行实验。
检测准备工作:
1. 请提 20 分钟从冰箱中取出试剂盒,平衡至室温。
2. 从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能有结晶,属于正常现象;
放置室温,轻摇均匀,待结晶完全溶解后再配置洗涤液。
可将 20ml 浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水稀释配置成
400ml 工作浓度的洗涤液,未用完的放回 4
3. 20×洗涤缓冲液的稀释:蒸馏水按 120 稀释,即 1 20×
洗涤缓冲液加 19 份蒸馏水。。实验原理:
试 剂 盒 采 用 双 抗 体 二 步 夹 心 法 酶 联 免 疫 吸 附 试 验
ELISA)。往预先包被人二肽基肽酶 4(DPP4)捕获抗体包被微
孔中,依次加入标本、标准品孵育,加入生物化抗体进行抗体
生物素化,经过温育并彻底后加入 HRP 标记的检测抗体,经
过温育并彻底洗涤。用底物 TMB 显色,TMB 在过氧化物酶的
催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色
的深浅和样品中的人二肽基肽酶 4DPP4)呈正相关。用酶标
仪在 450nm 波长下测定吸光度(OD 值),计算样品活性。
实验所需自备试验器材:
1. 酶标仪(450nm
2. 高精度加样器及枪头:0.5-10uL2-20uL20-200uL
200-1000uL
3. 37℃恒温箱
4. 蒸馏水或去离子水样本处理及要求:
1. 血清:将收集于血清分离管的全血标本在室温放置 2 小时
4℃过夜,然后 1000×g 离心 20 分钟,取上清即可,或
将上清置于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
2. 血浆:EDTA 或肝素作为抗凝剂采集标本,并将标本在
采集后的 30 分钟内于 2-81000×g 离心 15 分钟,取上
清即可检测,或将上清置于-20℃或-80℃保存,但应避免
反复冻融。
3. 组织匀浆:用预冷的 PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织,去除
残留血液(匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果),称重
后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的 PBS(一般按
1:9 的重量体积比,比如 1g 的组织样品对应 9mL PBS
具体体积可根据实验需要适当调整,并做好记录。推荐在
PBS 中加入蛋白酶抑制剂)加入玻璃匀浆器中,于冰上充
分研磨。为了进一步裂解组织细胞,可以对匀浆液进行超
声破碎,或反复冻融。后将匀浆液于 5000×g 离心 5~10
分钟,取上清检测。
4. 细胞培养物上清:1000×g 离心 20 分钟,取上清即可检
测,或将上清置于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。5. 其它生物标本:1000×g 离心 20 分钟,取上清即可检测。
6. 样品外观:样品应清澈透明,悬浮物应离心去除。
7. 样品保存:样品收集后若在 1 周内进行检测的可保存于
4℃,若不能及时检测,请按一次使用量分装,冻存于-20
1 个月内检测),或-80℃(6 个月内检测),避免反复冻
融,标本溶血会影响后检测结果,因此溶血标本不宜进
行此项检测。
注意事项:
1. 严格按照规定的时间和温度进行温育以保证准确结果。所
有试剂都必须在使用达到室温 20-25。使用后立即冷
藏保存试剂。
2. 洗板不正确可以导致不准确的结果。在加入底物确保尽
量吸干孔内液体。温育过程中不要让微孔干燥掉。
3. 消除板底残留的液体和手指印,否则影响 OD 值。
4. 底物显色液应呈无色或很浅的颜色,已经变蓝的底物液不
能使用。
5. 避免试剂和标本的交叉污染以免造成错误结果。
6. 在储存和温育时避免强光直接照射。
7. 平衡至室温后再打开密封袋以防水滴凝聚在冷板条上。8. 任何反应试剂不能接触漂白溶剂或漂白溶剂所散发的强
烈气体。任何漂白成分都会破坏试剂盒中反应试剂的生物
活性。
9. 不能使用过期产品。
10. 如果可能传播疾病,所有的样品都应管理好,按照规定的
程序处理样品和检测装置。
操作步骤:
1.从室温平衡 60min 后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板
条用自封袋密封放回 4℃。
2.设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准
品 50μL。
3.样本孔中加入待测样本 50μL;空白孔不加。样本如需
稀释,按照要求用试剂盒配套样本稀释液稀释样本。
4.每孔加入生物素标记抗体 50μL,用封板膜封住反应孔,
37℃水浴锅或恒温箱温育 30min;标准孔空白孔不加!
5.弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液(350μL),
静置 1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板 5
次(也可用洗板机洗板)。6.除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化
物酶(HRP)标记的检测抗体 100μL,用封板膜封住反应
孔,37℃水浴锅或恒温箱温育 30min。
7.弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液(350μL),
静置 1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板 5
次(也可用洗板机洗板)。
8.每孔加入底物 A、B 各 50μL,37℃避光孵育 15min。
9.每孔加入终止液 50μL,15min 内,在 450nm 波长处
测定各孔的 OD 值。
实验结果计算:
绘制标准曲线:在 Excel 工作表中,以标准品浓度作横坐标,
对应 OD 值作纵坐标,绘制出标准品线性回归曲线,按曲线方
程计算各样本浓度值。(此图仅供参考)
试剂盒性能:
1. 检测范围:5.6 U/L –320 U/L
2. 灵敏度:低检测浓度小于 1.38 U/L
3. 特异性:不与其它可溶性结构类似物交叉反应。
4. 重复性:板内变异系数小于 10% ,板间变异系数小于
15%
技术小提示:
1. 当混合或重溶蛋白溶液时,尽量避免起沫。
2. 为了避免交叉感染,配置不同浓度标准品、上样、加不同
试剂都需要更换枪头。另外不同试剂请分别使用不同的移
液槽。
3. 每次孵育时,请正确使用封板胶可保证结果的准确性。
4. 混合后的显色底物在上板应为无色,请避光保存;假如
微孔板后,将由物色变成不同深度的蓝色。
5. 终止液上板顺序应同显色底物上板顺序一致;加入终止液
后,孔内颜色由蓝变黄;若孔内有绿色,则表明孔内液体
未混匀;请充分混合。说明:
1. 由于现有条件及科学技术水平尚不能对所有供货商提供
的所有原料进行全面的鉴定与分析,本产品可能存在一定
的质量技术风险。
2. 终的实验结果与试剂的有效性、实验者的相关操作以及
当时的实验环境密切相关,请务必准备充足的标本备份。
3. 不同批次的同一产品可能会有少许差别,如:检测限、灵
敏度以及显色时间等,请依据试剂盒内说明书进行实验操
作,网站电子版说明书仅作参考。
4. 只有全部使用本试剂盒配套试剂才能保证检测效果,不能
混用其他制造商的产品。只有严格遵守本试剂盒的实验说
明才会得到佳的检测结果。
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