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一、概念

免疫荧光技术（Immunofluorescence technique ）又称荧光抗体技术，是标记免疫技术中发展早的一种。它是在免疫学、生物化学和显微镜技术的基础上建立起来的一项技术。很早以来就有一些学者试图将抗体分子与一些示踪物质结合，利用抗原抗体反应进行组织或细胞内抗原物质的定位。目我们可以对石蜡切片、冰冻切片、细胞爬片、组织芯片进行免疫荧光检测。

二、原理

免疫学的基本反应是抗原-抗体反应。由于抗原抗体反应具有高度的特异性，所以当抗原抗体发生反应时，只要知道其中的一个因素，就可以查出另一个因素。免疫荧光技术就是将不影响抗原抗体活性的荧光色素标记在抗体（或抗原）上，与其相应的抗原（或抗体）结合后，在荧光显微镜下呈现一种特异性荧光反应。

三、实验流程

（1）石蜡切片脱蜡至水，或者制作的冰冻切片用冷丙酮在4℃固定10－20分钟；

（2）抗原修复，冰冻切片无需修复；

（3）用0.01M PBST漂洗3次，每次5 min；

（4）滴加正常的血清室温封闭30 min；

（5）加未标记的特异性抗体，4℃过夜；

（6）用0.01M PBST漂洗3次，每次5 min（震荡漂洗）；

（7）加荧光标记的二抗抗体，37℃湿盒避光作用30 min；

（8） 0.01M PBST避光漂洗3次，每次5 min；

（9）甘油缓冲液封片；

（10）荧光显微镜观察。

四、实验结果

五、注意事项

1.荧光有衰减，寄回或者重拍都可能有荧光消失的现象，建议客户在下单时增加拍照张数。

2.做石蜡包埋样本保存及运输：常温置于4%多聚甲醛固定液内保存及运输（需注意固定液的量好是组织的10倍以上，样本需完全浸泡于固定液内并防止样本贴壁固定不良，大标本好使用大的标本瓶/袋运输，建议在大标本上按取材包埋要求做多条平行切口，以防标本中心固定不透彻。运输过程中防止固定液渗漏）。

3.做冰冻切片样本保存及运输：-80℃或液氮保存，干冰运输。