请联系官网进行咨询订购：实验动物模型定制|生物医学科研检测|试剂耗材提供-武汉傲星生物科技有限公司官网 () 

一、概念

透射电子显微镜(Transmission Electron Microscope,简称TEM),可以看到在光学显微镜下无法看清的小于0.2um的细微结构，这些结构称为亚显微结构或超微结构。要想看清这些结构，就必须选择波长更短的光源，以提高显微镜的分辨率

二、原理

透射电子显微镜（transmission electron microscope，TEM）是利用阴发射的电子，通过阳中央的微孔形成的电子束穿透样品获得样品的电子信号，经物镜、中间镜和投影镜等多电子放大至数百至数千万倍，后成像在荧光屏上便可即时观察，或是投射到照相底片感光片上作为记录。目TEM的分辨力可达0.2 nm。

由于标本必须置于高真空中进行电镜观察，所以电镜观察的生物标本必须特殊制备，不能含水，离体的生物标本要迅速加以固定，以防产生结构改变。另外，电子的穿透力很弱，这就需要把样品制成50 nm～100 nm厚的超薄切片（一个细胞切成100～200片）。为了使柔软的生物组织能够制成这样薄的切片，并使切片耐受高真空和电子轰击，所以在切片要进行包埋。超薄切片技术是透射电镜观察成功的关键。

三、实验流程

取材及戊二醛固定→漂洗→饿suan固定→漂洗→丙酮梯度脱水→渗透→包埋→切片→双染色→电镜观察及拍照

四、实验结果

五、注意事项

（一）取材

1、快：实验标本在动物麻醉或处死后1~2分钟内取材、固定完毕；临床活检标本力争组织离体后1分钟内固定。固定液为预冷的2.5%缓冲戊二醛固定液。

2、小：电镜标本的标准大小为1mm3。取材时，可先取稍大组织，经稍许时间的预固定后，再改小。

3、利：切割组织时，需用锋利的手术刀片、双面刀片划取，避免揉割、牵拉和挤压组织，防止机械损伤。禁止使用剪刀剪切。

4、净：取材所用器皿，应事先清洗干净并烘干。

5、冷：取材可在常温下进行。如有条件好在4℃低温下操作，以减少组织自溶。所用器械、容器及固定液均应预冷。

6、所取标本做好标记：瓶签上注明组别、编号等。

7、取材部位应准确：根据观察内容和实验目的，取材，如肿瘤取材时，应确保取到肿瘤实质，避免取肿瘤间质或出血、坏死部位。

（二）固定

预固定：2.5%缓冲戊二醛固定液，用量应为10~20倍于组织块的体积，4℃固定至少30min以上。

取适量0.1mol/L PBS缓冲液清洗3次，每次10min。

后固定：1%饿suan固定，肾脏固定4min，其他组织固定1h。

取适量0.1mol/L PBS缓冲液清洗3次，每次10min。

（三）培养细胞的取材和固定细胞样本做透射电镜处理办法与保存条件

1．常规收集帖壁和悬浮细胞，置离心管中离心，800～1000r/min，10min。

2．用0.01mol/L PBS 5ml重悬细胞。

3．将细胞悬液吸入有琼脂空槽的离心管中。

4．离心，2000r/min，15～20min，使细胞成团。

5．小心吸去上清，加入2.5％戊二醛固定液固定细胞团，以免细胞团散开。

6．取出离心管内的琼脂，仔细切下尖槽内含有细胞团的琼脂块。

7．将含细胞的团琼脂块投入含戊二醛固定液的小瓶中，4℃保存。

8．用0.1mol/L PBS缓冲液洗1次。

9．1％饿suan后固定30～60min。