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实验概念
酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay,简写ELISA)指将可溶性的抗原或抗体结合到聚苯乙烯等固相载体上,利用抗原抗体特异性结合进行免疫反应的定性和定量检测方法。酶联免疫吸附测定(ELISA)为免疫学中的经典实验。
实验流程(具体步骤以说明书为准):
取出ELISA试剂盒→封闭→洗涤→加入一抗→洗涤→加HRP标记的二抗→洗涤→底物显色→加入终止液→酶标仪读数→数据分析
送样本要求
样本形式 | 处理方式 | 保存 | 运输 |
血清 | 干燥管(黄色)或促凝管(红色)收集全血,室温自然凝固10-20min,离心5-10min(2500-3500rpm/min)。采血过程中应避免溶血,仔细收集上清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心 | -20℃或更低 | 冰袋或干冰 |
血浆 | 抗凝管(紫色、黑色、绿色)收集全血,采集后马上混匀,静置10min左右,离心5-10min(2500-3500rpm/min)。仔细收集上清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心 | -20℃或更低 | 冰袋或干冰 |
尿液 | 用无菌管收集,离心10-20min(2500-3500rpm/min),仔细收集上清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心 | -20℃或更低 | 冰袋或干冰 |
粪便 | 用无菌15ml离心管收集, 1g样本+9ml PBS(0.01M,pH=7.4),充分匀浆完离心5-10min(2500-3500rpm/min),取上清备用 | -20℃或更低 | 冰袋或干冰 |
胸腹水、脑脊液、肺泡灌洗液 | 同尿液 | -20℃或更低 | 冰袋或干冰 |
细胞 | 检测分泌性的成份:用无菌管收集,5-10min(2500-3500rpm/min),仔细收集上清 | -20℃或更低 | 冰袋或干冰 |
细胞内指标:吸去培养板内的培养基,胰酶消化细胞,收集细胞沉淀,PBS(0.01M,PH=7.4)清洗一次,PBS稀释细胞悬液,细胞浓度达到1×107个/ml左右,充分研磨后超声裂解(或反复冻融),以使细胞破坏并放出细胞内成份,离心5-10min(2500-3500rpm/min),取上清备用 |
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动物组织 | 用无菌15ml离心管收集,组织重量不能低于50mg,1g组织加入9ml PBS(0.01M,PH=7.4),手工或匀浆器将标本匀浆充分,匀浆过程中,PBS分2次加进去,这样匀浆更充分。充分匀浆完离心5-10min(2500-3500rpm/min)。取上清备用(切勿加入细胞裂解液) | -20℃或更低 | 冰袋或干冰 |
植物组织 | 用无菌15ml离心管收集,组织重量不能低于50mg,1g组织加入9ml PBS(0.01M,PH=7.4),手工或匀浆器将标本匀浆充分,匀浆过程中,PBS分2次加进去,这样匀浆更充分。充分匀浆完离心5-10min(2500-3500rpm/min)。取上清备用(切勿加入细胞裂解液) | -20℃或更低 | 冰袋或干冰 |
牛奶 | 8000转高速离心,离心后分三层,上层是脂肪层,中间层是乳清,底层是固态蛋白,取中间层保存备用。乳清量参照血清量。 | -20℃或更低 | 冰袋或干冰 |
注意事项; | |||
血常规样本为EDTA-K2抗凝的全血样本,抗凝管紫色头盖管,收集混匀不能凝血,样本量不能少于0.2ml。当天检测,此检测为全套结果,不单独检测某一项或者几项。 |