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实验概念
血管形成体外模型可分为细胞水平的增殖实验、迁移实验和管腔形成实验,以及器官水平的人胎盘血管段培养模型和大鼠动脉环模型。目通常所说的血管形成实验是指管腔形成实验。管腔形成反映毛细血管的早期过程,是体外检查内皮细胞功能完整的指标。
血管形成过程中内皮细胞会形成细胞条索,然后形成管腔,体外在特定条件下如基质胶、胶原等培养时也能形成管腔。药物通过抑制管腔形成或使形成的管腔断裂来达到抑制血管形成的作用。借助计算机软件计算小管数及小管之间的连接数及小管的长度和面积,可定量分析药物对管腔形成的影响。
实验流程
细胞培养→细胞接种→加药处理→结果分析
注意事项
1.流式检测样本 |
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样本形式 | 处理方式 |
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血样 | 当天采集的血液,置于抗凝管中,建议血量≥2mL,单个血样对应分组较多时应适当加大采血量 | 4小时之内完成淋巴细胞分离 |
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组织 | 新鲜标本离体后置于PBS中,4℃保存运输。离体时间不可超过24小时。 |
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细胞 | 武汉本地客户可以将培养细胞的孔板交予销售带至实验室,需要用封口膜密封,防止漏液。外地客户需将有活力的细胞置于培养瓶中常温快递至公司检测 |
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注意事项: |
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2.其他检测 |
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检测形式 | 处理方式 | 保存 | 运输 |
流式细胞周期检测 | 将细胞正常消化后,冷PBS悬浮细胞,之后缓慢加入4℃预冷无水乙醇固定,乙醇终浓度75% | -20℃ | 冰袋 |
流式细胞凋亡检测 | 将细胞正常消化后,PBS洗一遍,PBS重悬 | 必须当天送样 | 冰袋 |
Tunel细胞凋亡检测 | 有活力的细胞,弃去培养液,PBS冲洗后,加入足量4%多聚甲醛,培养板附上保鲜膜,盖上板盖,胶布缠裹固定,避免固定液体流出 | 4℃ | 冰袋 |
原代分离实验 | 无菌采取完整的组织块,新鲜组织离体后置于无菌培养基中 | 离体时间不可超过4小时 | 冰袋 |
血小板的分离 | 需要选择医用真空采血管获得抗凝血,全过程样本均需在20±2℃的条件下进行。为获得佳的实验结果,好在取血2h内进行实验,血液存放时间越长,细胞分离效果越差。血液放置超过6h后分离效果更差甚至不能达到分离目的。 | 4℃ | 冰袋 |
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