小鼠三叶因子（TFF）ELISA试剂盒文档

小鼠三叶因子（TFF）ELISA试剂盒文档

一、概述

小鼠三叶因子（TFF）ELISA试剂盒是一种用于定量检测小鼠血清、血浆、组织匀浆、细胞裂解液、细胞培养上清液及其他生物液体中小鼠三叶因子含量的实验工具。该试剂盒采用双抗体夹心ELISA法，具有高灵敏度、高特异性和操作简便的特点，广泛应用于生物医学研究、临床诊断及血清流行病学调查等领域。

二、产品特点

1. 高灵敏度：检测限低，能够精确检测样品中小鼠三叶因子的微量变化。

2. 高特异性：不与其他可溶性结构类似物交叉反应，确保检测结果准确可靠。

3. 操作简便：试剂盒内组分齐全，操作步骤简单明了，适合大规模样本检测。

4. 稳定性好：试剂盒在2-8℃条件下避光防潮保存，有效期长达6个月。

三、产品规格与组成

规格

• 96T/48T：根据实验需求选择不同规格。

试剂盒组成

• 96孔配置

• 微孔酶标板：12孔×8条

• 标准品：0.3mL×6管

• 样本稀释液：6mL

• 检测抗体-HRP：10mL

• 20×洗涤缓冲液：25mL

• 底物A：6mL

• 底物B：6mL

• 终止液：6mL

• 封板膜：2张

• 说明书：1份

• 自封袋：1个

• 48孔配置

• 微孔酶标板：12孔×4条

• 标准品：0.3mL×6管

• 样本稀释液：3mL

• 检测抗体-HRP：5mL

• 20×洗涤缓冲液：15mL

• 底物A：3mL

• 底物B：3mL

• 终止液：3mL

• 封板膜：2张

• 说明书：1份

• 自封袋：1个

四、实验原理

小鼠三叶因子ELISA试剂盒利用双抗体夹心法进行检测。首先，将小鼠三叶因子抗体包被于96孔微孔板中制成固相载体，然后向微孔中加入标准品或待测样品，样品中的小鼠三叶因子与固相载体上的抗体结合。随后，加入生物素化的小鼠三叶因子抗体，与已结合的小鼠三叶因子形成抗体-抗原-抗体复合物。洗去未结合的抗体后，加入HRP标记的亲和素，再次洗涤后加入TMB底物显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化为蓝色，并在酸的作用下转化为黄色，颜色的深浅与样品中小鼠三叶因子的浓度呈正相关。在450nm波长下测定各孔的吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中小鼠三叶因子的浓度。

五、实验步骤

1. 试剂准备：将试剂盒平衡至室温，按照说明书要求稀释洗涤缓冲液和其他试剂。

2. 设置标准品孔和样本孔：标准品孔各加不同浓度的标准品50μL，样本孔先加待测样本10μL，再加样本稀释液40μL（即样本稀释5倍）。

3. 加入检测抗体：除空白孔外，每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，封板膜封住反应孔，37℃温育60分钟。

4. 洗涤：弃去液体，拍干后每孔加满洗涤液，静置1分钟，重复洗板5次。

5. 显色：每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15分钟。

6. 终止反应：每孔加入终止液50μL，15分钟内在450nm波长处测定各孔的OD值。

六、结果判断与计算

以标准品浓度为横坐标，OD值为纵坐标，绘制标准曲线。通过标准曲线和样品的OD值，可以计算出样品中小鼠三叶因子的浓度。

七、注意事项

1. 试剂保存：未开封的试剂盒应按照试剂瓶标签所示条件保存，开封后的酶标板应加干燥剂后密封保存于-20℃。

2. 操作规范：实验过程中应避免交叉污染，加样时应避免产生气泡，尽量不触及孔壁。

3. 样品处理：

1. 样品应新鲜采集并尽快处理，避免反复冻融，以保证检测结果的准确性。

2. 样品应根据实验要求进行适当的稀释或处理，以避免超过试剂盒的检测范围或影响检测结果。

3. 如有必要，应对样品进行预处理以去除可能干扰检测的物质，如高浓度的非特异性蛋白、脂肪等。

4. 温育条件：

1. 确保所有温育步骤在指定的温度和时间下进行，避免温度波动对实验结果的影响。

2. 温育时应避免使用加热块或水浴锅，以免蒸发影响结果。建议使用恒温箱或恒温水槽进行温育。

5. 洗涤步骤：

1. 洗涤是ELISA实验中至关重要的步骤，应充分洗涤以去除未结合的抗体和杂质，但也要避免洗涤过度导致抗原-抗体复合物脱落。

2. 洗涤时应确保每个孔都被洗涤液充分润湿，并尽量拍干残留液体。

6. 结果解读：

1. 结果解读时应参考标准曲线，确保标准曲线的线性关系和准确性。

2. 如果样品的OD值超出标准曲线的范围，应适当调整样品稀释度重新检测。

3. 注意区分阴性对照和空白对照的OD值，以判断实验的特异性和灵敏度。

7. 质量控制：

1. 每次实验应设立阳性对照、阴性对照和空白对照，以监控实验的准确性和可靠性。

2. 定期检查试剂盒的有效期和保存条件，确保试剂的活性和质量。

8. 安全操作：

1. 实验过程中应佩戴适当的个人防护装备，如实验服、手套和防护眼镜等。

2. 废弃物应按照实验室规定进行处理，避免对环境和人体造成危害。

八、结论

小鼠三叶因子（TFF）ELISA试剂盒是一种高效、准确的检测工具，能够为生物医学研究、临床诊断及血清流行病学调查等领域提供有力的支持。通过遵循正确的实验步骤和注意事项，可以确保实验结果的准确性和可靠性。希望本文档能够为使用者提供有益的指导和帮助。

原创作者：上海杰普斯生物科技有限公司