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DH10B电转克隆感受态
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产品简介DH10B 电击感受态细胞只能用于电击转化,不能用于热激转化。DH10B 菌株来源于 MC1061 菌株,
mcrA、mcrBC 及 mrr 突变使 DH10B 菌株适合于克隆富含甲基胞嘧啶或甲基腺嘌呤的 DNA (无论真
核生物还是原核生物的基因组 DNA 都能被高效的转入 DH10B 中)。recA1 和 endA1 的突变有利于插
入 DNA 的稳定和高纯度质粒 DNA 的提取。φ80dlacZ∆M15 标记的存在使 DH10B 可用于蓝白斑筛
选,rpsL 赋予其链霉素抗性。 DH10B 感受态细胞适用于大质粒的构建或者各种文库构建,经特殊
工艺制作,pUC18 质粒检测转化效率>1010cfu/μg DNA。
产品组成
组分
DH10B 感受态细胞
10 × 50 μL
100 ×50μL
定制
基因型:F- mcrA ∆(mrr-hsdRMS-mcrBC) φ80lacZ∆M15 ∆lacX74 recA1 endA1 araD139 ∆(ara, leu)7697
galE15 galK λ- rpsL nupG
存储条件
-80 ℃保存;请勿将本品置于-20 ℃或者液氮中保存。
质量控制
无外源质粒 DNA 残留;
电转法转化效率≥1010 cfu/μg pUC18 DNA。
使用方法
1. 0.1cm 电击杯和杯盖从储存液中拿出倒置于干净的吸水纸上5分钟,待其沥干水分,正置5分钟,
使乙醇充分挥发,待乙醇挥发干净立即插入冰中,压实冰面,电杯顶离冰面 0.5 cm 以方便盖上杯
盖,冰中静置 5 分钟充分降温。
2. 取-80℃保存的 DH10B 电击感受态细胞插入冰中 5 分钟,待其融化,加入目的 DNA (质粒或连接
产物)并用手拨打 EP 管底轻轻混匀,避免产生气泡,立即插入冰中。
A. 测定转化效率使用 1 μl 10 pg/μl 的对照质粒 pUC18;
B. 对于连接产物,请用乙醇沉淀 DNA 后加入适量 TE 缓冲液 (10mM Tris HCl, pH7.5; 1mM EDTA)重
悬,DNA 浓度不超过 100ng/μl,体积不超过 5μl/50μl 感受态。
3. 用 200 μl 枪头将感受态-DNA 混合物快速移到电击杯中,避免产生气泡,盖上杯盖。
4. 启动电转仪,设置参数:C=25 μF,PC=200 Ω,V=1.8 kV (此为 BioRad 电转仪推荐参数,也可按
所用电转仪推荐的参数操作),将电击杯快速放入电转槽中,电击完成快速插入冰中。
5. 2 分钟后从冰中取出电击杯,放室温,加入 700 μl 不含抗生素的无菌 S.O.C. 培养基(室温),用
1ml 枪吹吸电击杯底部数次混匀后,转移到 50ml 离心管(BD Falcon50ml 锥形离心管等),向离心
管中补加 S.O.C. 培养基至 5ml。37℃,225 rpm 复苏 60 分钟。
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