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GV3101(pSoup)(电转)
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详细内容
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产品简介GV3101(pSoup)菌株为 C58 型背景,核基因中含有筛选标签——利福平抗性基因
Rif,为了便于转化操作,此菌株携带一无自身转运功能的胭脂碱型 Ti质粒 pMP90 (pTiC58DT-DNA),此质粒含有 vir基因 (vir
基因是 T-DNA 插入植物基因组必需的元件,pMP90 (pTiC58DT-DNA)质粒自身的 T-DNA 转移功能被破
坏,但可以帮助转入的双元载体 T-DNA 顺利转移)。pMP90 (pTiC58DT-DNA)型 Ti 质粒含有筛选标签:
Gent,赋予 GV3101 菌株庆大霉素抗性;在 GV3101 菌株中转入 help 质粒:pSoup 即为 GV3101(pSoup)
菌株,可帮助 pGreen,62SK,pGs2 系列质粒在农杆菌中复制,同时赋予该菌株四环素(Tet)抗性。适
用于拟南芥、烟草、玉米、土豆等植物的转基因操作。本公司开发的 GV3101(pSoup)电转感受态特别适
用于大质粒的转化:经 pGs2(卡那霉素抗性)质粒检测转化效率>105 cfu/μg DNA。
产品组成
组分
GV3101(pSoup)
电转感受态细胞
10 × 50μL
100 × 50μL
定制
基因型:C58 (RifR) Ti pMP90 (pTiC58DT-DNA) ( GentR) Nopaline(pSoup-TetR)
存储条件
-80 ℃保存;请勿将本品置于-20 ℃或者液氮中保存。
质量控制
除胭脂碱型 Ti 质粒 pMP90 和 pSoup 质粒外,无外源质粒 DNA 残留;
电转法转化效率≥105 cfu/μg DNA。
使用方法
1. 将新的 2 mm 电击杯插入冰中预冷;或者将储存于 75%乙醇中的 2 mm 电击杯和杯盖取出,在超净工
作台中将其倒置于干净的吸水纸上,使乙醇充分挥发,然后插入冰中预冷;
2. 取-80℃保存的农杆菌感受态插入冰中待其融化,加入 0.01-1μg 质粒 DNA(体积不大于 5μl),用
200μl 枪头将感受态-质粒混合物快速转移到预冷的电击杯中,盖上杯盖;
3. 开启电转仪,设置参数(2500 V ,200 Ω,25μF),将电击杯快速放入电转槽中,电击完成后快速插
入冰中,加入 900 μl 无抗生素的 YEB 并将感受态细胞转移到无菌空管中,28 ℃振荡培养 2~3 小时。
(注:此电转化参数为 Bio-rad 推荐,使用者也可使用电转仪所推荐的 Protocol 进行操作)
4. 6000 rpm 离心一分钟收菌,留取 100μl 左右上清将菌体轻轻吹匀,并涂布于含相应抗生素的 YEB 平板
上,倒置放于 28℃培养箱培养 2~3 天(当平板只含有 50μg/ml Kan 时,28℃培养 48 h 即可;平板中同时
加入 50μg/ml Kan,20μg/ml Rif 时,需 28℃培养 60 h;如果使用的平板含有 50μg/ml Rif 时,则需要 28 ℃
培养 72~90 h)。
注意事项
1. 感受态细胞解冻后应立即使用;
2. 加入的待转化 DNA 的总体积不应超过感受态细胞体积的 1/10;
3. 利福平浓度不应高于 25μg/μl,利福平浓度过高不利于农杆菌生长,会降低其生长速度和转化效率。
4. 由于 Ti 质粒丢失的概率低(可以忽略),所以相关抗性基因可以不用添加。
GV3101 | EC96304-01 | 10 ×50ul | 420 |
EC96304-02 | 100×50ul | 3000 | |
GV3101(pSoup) | EC96305-01 | 10 ×50ul | 420 |
EC96305-02 | 100×50ul | 3000 | |
GV3101(pSoup-19) | EC96303-01 | 10 ×50ul | 420 |
EC96303-02 | 100×50ul | 3000 | |
GV3101(pJlC SA-rep) | EC96308-01 | 10 ×50ul | 420 |
EC96308-02 | 100×50ul | 3000 | |
EHA105 | EC96301-01 | 10 ×50ul | 420 |
EC96301-02 | 100×50ul | 3000 | |
AGL1 | EC96307-01 | 10 ×50ul | 420 |
EC96307-02 | 100×50ul | 3000 | |
LBA4404 | EC96302-01 | 10 ×50ul | 420 |
EC96302-02 | 100×50ul | 3000 | |
EHA101 | EC96306-01 | 10 ×50ul | 420 |
EC96306-02 | 100×50ul | 3000 |
电话:17321241593 手机:17321241593 联系人:Tina Q Q:1503472510
热门标签:电转根癌农杆菌感受态