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Ar A4感受态(电转)
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产品简介发根农杆菌是根瘤菌科(Rhizobiaceae)农杆菌属(agrobacterium)的一种革兰氏阴性土壤细菌,它能够
感染 大多数双子叶植物和少数单子叶植物以及个别裸子植物。Ar.A4 发根农杆菌菌株含有农杆碱型
Ri 质粒,具有广泛的宿主范围(玉米,烟草,胡萝卜,甘草等),同时具有卡那霉素抗性。本公
司生产的 Ar.A4 化学转化感受态细胞经特殊工艺制作,pK7WGF2 质粒(壮观霉素抗性)检测,转
化效率>105 cfu/μg DNA。
产品组成
组分
Ar.A4
电转感受态细胞
10 ×100 μL
100 ×100μL
定制
基因型:Agrobacterium rhizogenes(kanR ) Ar A4 Ri(agropine type)
存储条件
-80 ℃保存; 请勿将本品置于-20 ℃或者液氮中保存。
质量控制
无外源质粒 DNA 残留
电转法转化效率≥105 cfu/μg DNA。
使用方法
1. 0.1 cm 电击杯和杯盖从储存液中拿出倒置于干净的吸水纸上 5 分钟,待其沥干水分,正置 5 分钟,使
乙醇充分挥发,待乙醇挥发干净立即插入冰中,压实冰面,电杯顶离冰面 0.5 cm 以方便盖上杯盖,冰
中静置 5 分钟充分降温。
2. 取-80℃保存的农杆菌感受态插入冰中 5分钟,待其融化,加入 0.01-1 μg质粒 DNA(体积不大于 6ul),
用手拨打管底混匀,立即插入冰中,用200 μl枪头将感受态-质粒混合物快速移到电击杯中,盖上杯盖,
空管保留待用。
3. 启动电转仪,设置参数:C=25 μF,PC=200 ohm,V=2400 V(此参数为 Biorad 推荐,使用者也可按
所用电转仪推荐的 protocol 操作),将电击杯快速放入电转槽中,电击完成快速插入冰中,加入 900 μl
无抗生素的 LB 并转移到感受态空管中,28℃振荡培养 2~3 小时。
4. 6000 rpm 离心一分钟收菌,留取 100 μl 左右上清轻轻吹打重悬菌块涂布于含相应抗生素的 LB 或 YEB
平板上,倒置放于 28℃培养箱培养 2-3 天(当平板只含有 50 μg/ml kan 时,28℃培养 48 h 即可;平板中
同时加入 50 μg/ml kan,20 μg/ml rif 时,需 28℃培养 60 h;如果使用的平板含有 50 μg/ml rif 则需要 28℃
培养 72-90 h)。
注意事项
1. 感受态细胞冰浴中解冻后应立即使用;
2. 加入的待转化 DNA 的总体积不应超过感受态细胞体积的 1/10;
3. 利福平浓度不应高于 25ug/ul,过高的利福平浓度不利于农杆菌生长,会降低其生长速度和转化效率。
4. Ar.A4 具有卡那霉素抗性,不可用于具有卡那霉素抗性质粒的转化。
化转发根农杆菌感受态 | |||
Ar A4 | CC96311-01 | 10 ×100ul | 360 |
CC96311-02 | 100×100ul | 2448 | |
Ar Qual | CC96312-01 | 10 ×100ul | 360 |
CC96312-02 | 100×100ul | 2448 | |
MSU440 | CC96316-01 | 10 ×100ul | 360 |
CC96316-02 | 100×100ul | 2448 | |
K599 | CC96315-01 | 10 ×100ul | 360 |
CC96315-02 | 100×100ul | 2448 | |
Ar 1193 | CC96310-01 | 10 ×100ul | 360 |
CC96310-02 | 100×100ul | 2448 | |
C58C1 | CC96313-01 | 10 ×100ul | 360 |
CC96313-02 | 100×100ul | 2448 | |
电转发根农杆菌感受态 | |||
Ar A4 | EC96311-01 | 10 ×50ul | 600 |
EC96311-02 | 100×50ul | 4200 | |
Ar Qual | EC96312-01 | 10 ×50ul | 600 |
EC96312-02 | 100×50ul | 4200 | |
MSU440 | EC96316-01 | 10 ×50ul | 600 |
EC96316-02 | 100×50ul | 4200 | |
K599 | EC96315-01 | 10 ×50ul | 600 |
EC96315-02 | 100×50ul | 4200 | |
Ar 1193 | EC96310-01 | 10 ×50ul | 600 |
EC96310-02 | 100×50ul | 4200 |
电话:17321241593 手机:17321241593 联系人:Tina Q Q:1503472510
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