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K599感受态(电转)
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产品简介发根农杆菌是根瘤菌科(Rhizobiaceae)农杆菌属(agrobacterium)的一种革兰氏阴性土壤细菌,它能够
感染大多数双子叶植物和少数单子叶植物以及个别裸子植物。K599 发根农杆菌(NCPPB2659)含
有 pRi2659 农杆碱型 Ri 质粒,具有广泛的宿主范围(葫芦科,豆科,茄科等),同时具有链霉素
抗性。本公司生产的 K599 化学转化感受态细胞经特殊工艺制作,pCAMBIA2301
质粒(卡那霉素抗性)检测,转化效率>105 cfu/μg DNA。
产品组成
组分
K599
电转感受态细胞
10 ×50 μL
100 ×50μL
定制
基因型:Agrobacterium rhizogenes (StrR ) pRi2659 (agropine type)
存储条件
-80 ℃保存; 请勿将本品置于-20 ℃或者液氮中保存。
质量控制
除农杆碱型 Ri 质粒 pRi2659 外,无外源质粒 DNA 残留
电转法转化效率≥105 cfu/μg DNA。
使用方法
1. 将新的 2 mm 电击杯插入冰中预冷;或者将储存于 75%乙醇中的 2 mm 电击杯和杯盖取出,在超净工
作台中将其倒置于干净的吸水纸上,使乙醇充分挥发,然后插入冰中预冷;
2. 取-80℃保存的农杆菌感受态插入冰中待其融化,加入 0.01-1μg 质粒 DNA(体积不大于 5μl),用
200μl 枪头将感受态-质粒混合物快速转移到预冷的电击杯中,盖上杯盖;
3. 开启电转仪,设置参数(2500V ,200Ω,25μF),将电击杯快速放入电转槽中,电击完成后快速插
入冰中,加入 900μl 无抗生素的 YEB 并将感受态细胞转移到无菌空管中,28 ℃振荡培养 2~3 小时。
(注:此电转化参数为 Bio-rad 推荐,使用者也可使用电转仪所推荐的 Protocol 进行操作)
4. 6000 rpm 离心一分钟收菌,留取 100μl 左右上清将菌体轻轻吹匀,并涂布于含相应抗生素的 YEB 平
板 上,倒置放于 28℃培养箱培养 2~3 天。
注意事项
1. 加入质粒时体积不应大于感受态体积的 1/10;
2. 电转感受态细胞中不可混入气泡,转化高浓度的质粒可相应减少终用于涂板的菌量;
3. 平板上阳性克隆密度不宜过大,为了获得大的菌落,应减少质粒用量或终用于涂板的菌量;
4. K599 具有链霉素抗性,不可用于具有链霉素抗性质粒的转化
化转发根农杆菌感受态 | |||
Ar A4 | CC96311-01 | 10 ×100ul | 360 |
CC96311-02 | 100×100ul | 2448 | |
Ar Qual | CC96312-01 | 10 ×100ul | 360 |
CC96312-02 | 100×100ul | 2448 | |
MSU440 | CC96316-01 | 10 ×100ul | 360 |
CC96316-02 | 100×100ul | 2448 | |
K599 | CC96315-01 | 10 ×100ul | 360 |
CC96315-02 | 100×100ul | 2448 | |
Ar 1193 | CC96310-01 | 10 ×100ul | 360 |
CC96310-02 | 100×100ul | 2448 | |
C58C1 | CC96313-01 | 10 ×100ul | 360 |
CC96313-02 | 100×100ul | 2448 | |
电转发根农杆菌感受态 | |||
Ar A4 | EC96311-01 | 10 ×50ul | 600 |
EC96311-02 | 100×50ul | 4200 | |
Ar Qual | EC96312-01 | 10 ×50ul | 600 |
EC96312-02 | 100×50ul | 4200 | |
MSU440 | EC96316-01 | 10 ×50ul | 600 |
EC96316-02 | 100×50ul | 4200 | |
K599 | EC96315-01 | 10 ×50ul | 600 |
EC96315-02 | 100×50ul | 4200 | |
Ar 1193 | EC96310-01 | 10 ×50ul | 600 |
EC96310-02 | 100×50ul | 4200 |
电话:17321241593 手机:17321241593 联系人:Tina Q Q:1503472510
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