15P-1(小鼠睾丸上皮细胞)
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详细内容
一.培养基及培养冻存条件准备:
1) 准备DMEM培养基;优质胎牛血清,5%;双抗,1%。
2) 培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%。
3) 冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配。
二.细胞处理:
1)冻存细胞的复苏::
将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入到含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min,弃去上清液,完全培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基的培养瓶(或皿)中37℃培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。
2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
对于贴壁细胞传代可以参考以下方法:
1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加入0.25%(w / v)胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中(T25瓶1-2mL,T75瓶2-3mL),置于37℃培养箱中消化1-2分钟(难消化的细胞可以适当延长消化时间),然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10%FBS的培养基来终止消化。
3.轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心3-5min,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1:2的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力,后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。
3)细胞冻存: 收到细胞后建议在培养3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。下面T25瓶为例;
1. 细胞冻存时按照细胞传代的过程收集消化好的细胞到离心管中,可使用血球计数板计数,来决定细胞的冻存密度。一般细胞的推荐冻存密度为1×106~1×107个活细胞/ml.
2. 1000rpm离心3-5min,去掉上清。用配制好的细胞冻存液重悬细胞 ,按每1ml冻存液含1×106~1×107个活细胞/ml分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中,标注好名称、代数、日期等信息。
3. 将要冻存的细胞置于程序降温盒中,-80度冰箱中过夜,之后转入液氮容器中储存。同时记录好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。
注意事项:
1. 所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性,必须在二生物安全台内操作,并请注意防护,所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。
2. 建议在复苏冻存细胞时始终使用防护手套、衣服和戴上防护面罩。注意:冻存管浸没在液氮中会泄漏,并会慢慢充满液氮。解冻时,液氮转化成气相可能导致容器爆炸或用危险力吹掉其盖子,从而产生飞扬的碎屑造成人员伤害。
CL-0579 | ¥1,800.00 | PATU8988T | PATU8988T(人胰腺癌细胞) | 1×106cells/T25培养瓶 |
CL-0583 | ¥1,800.00 | T98G | T98G(人脑胶质瘤细胞) | 1×106cells/T25培养瓶 |
CL-0586 | ¥1,600.00 | KYSE-410 | KYSE-410(人食管鳞癌细胞) | 1×106cells/T25培养瓶 |
CL-0587 | ¥1,600.00 | BALL-1 | BALL-1(人B淋巴细胞急性白血病) | 1×106cells/T25培养瓶 |
CL-0588 | ¥1,800.00 | HAL-01 | HAL-01(人淋巴细胞白血病细胞) | 1×106cells/T25培养瓶 |
CL-0590 | ¥1,500.00 | MMQ | MMQ(大鼠垂体瘤细胞) | 1×106cells/T25培养瓶 |
CL-0597 | ¥1,500.00 | MH-S | MH-S(小鼠肺泡巨噬细胞) | 1×106cells/T25培养瓶 |
CL-0598 | ¥1,600.00 | bEnd.3 [BEND3] | bEnd.3 [BEND3] (小鼠脑微血管内皮细胞) | 1×106cells/T25培养瓶 |
CL-0600 | ¥1,800.00 | GC-1 spg | GC-1 spg(小鼠精原细胞) | 1×106cells/T25培养瓶 |
CL-0601 | ¥1,000.00 | B16-F0 | B16-F0(小鼠黑色素瘤细胞) | 1×106cells/T25培养瓶 |
CL-0602 | ¥1,500.00 | AML12 | AML-12(小鼠正常肝细胞) | 1×106cells/T25培养瓶 |
CL-0603 | ¥2,000.00 | KGN | KGN(人卵巢颗粒细胞) | 1×106cells/T25培养瓶 |
CL-0604 | ¥1,500.00 | B82 | B82(小鼠肿瘤细胞系) | 1×106cells/T25培养瓶 |
CL-0606 | ¥1,800.00 | 15P-1 | 15P-1(小鼠睾丸上皮细胞) | 1×106cells/T25培养瓶 |
CL-0607 | ¥1,800.00 | JM | JM(人T淋巴细胞白血病细胞) | 1×106cells/T25培养瓶 |
CL-0609 | ¥1,500.00 | NCI-H2347 | NCI-H2347(人肺癌细胞) | 1×106cells/T25培养瓶 |
CL-0610 | ¥1,500.00 | SNU-182 | SNU-182(人肝癌细胞) | 1×106cells/T25培养瓶 |
CL-0611 | ¥1,600.00 | HPAF-II | HPAF-II(人胰腺癌细胞) | 1×106cells/T25培养瓶 |
CL-0612 | ¥1,600.00 | SNU-387 | SNU-387(人肝癌细胞) | 1×106cells/T25培养瓶 |
CL-0613 | ¥1,800.00 | 8305C | 8305C(人甲状腺癌细胞(未分化)) | 1×106cells/T25培养瓶 |
CL-0615 | ¥1,800.00 | Daoy | Daoy(人髓母细胞瘤细胞) | 1×106cells/T25培养瓶 |
CL-0616 | ¥1,500.00 | HC11 | HC11(小鼠乳腺上皮细胞) | 1×106cells/T25培养瓶 |
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