ANNEXIN V- FITC/PI 凋亡检测试剂盒

CC2210 ANNEXIN V- FITC/PI 凋亡检测试剂盒.
英文名称 : Annexin V-FITC Apoptosis Detection Kit
储存条件 : 2-8°C，复检期为一年
ANNEXIN V- FITC/PI 凋亡检测试剂盒 细胞

ANNEXIN V-FITC/PI凋亡检测试剂盒说明书

货号：CC2210

规格：20T/50T/100T

保存：贮存于 2-8°C，复检期为一年。

 产品说明：

细胞凋亡是细胞的基本特征，在机体的胚胎发育、组织修复、内环境的稳定等方面都起到十分重要的作用。Annexin V是一种分子量为35.8 KD的Ca²⁺依赖性磷脂结合蛋白，能与细胞凋亡过程中翻转到膜外的磷脂酰丝氨酸（Phosphatidylserine, PS）高亲和力特异结合。FITC-Annexin V结合到凋亡细胞后，在蓝色光的激发下，发出绿色荧光，区分出凋亡细胞与正常细胞。碘化丙啶（Propidium iodide，PI）是一种核酸染料，它不能穿透完整细胞膜，但对凋亡晚期细胞和死细胞的破损细胞膜能够穿透，并使细胞核红染。将FITC-Annexin V与PI匹配使用，可以将凋亡早期的细胞和晚期的细胞区分开来。

操作步骤:

       1、 用 27mL 的去离子水稀释3mL Binding Buffer（10×）至 30mL，每次用3mL。

2、 收集细胞（1×10⁶个/次），然后用冷的PBS洗涤。（对于贴壁细胞，先用胰酶消化，再用 PBS 洗涤）。

3、 用 1mL 1×的 Binding Buffer 悬浮细胞，300×g 离心 10min，弃上清。

4、 用 1mL 1×的 Binding Buffer 重悬细胞，使细胞的密度达到 1×10 ⁶个/mL。

5、 每管加入100?L细胞（1×10⁵个）。

6、 再向管中加入5?L Annexin V-FITC。

7、 室温，避光，轻轻地混匀，10min。

8、 加入5?L PI，室温，避光，孵育 5min。

9、 加入PBS至500?L，轻轻混匀。

10、在 1小时内用流式细胞仪检测。

注意事项:

       为保证得到理想的实验结果在使用此试剂盒之前请认真阅读该注意事项。

       1. 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。

2. Annexin V-FITC和Propidium iodide是光敏物质，在保存与操作时请注意避光。

3. Propidium iodide（PI）能通过皮肤吸收，对眼睛有刺激作用。

4. 在细胞洗涤的后一步，请尽量将上清弃净，以免PBS残留影响实验结果。

5. PI染色时间过长有可能造成检测的凋亡率偏高，建议首*行Annexin V-FITC染色，上机前5分钟再加入PI染色。

6. 整个操作过程动作要尽量轻柔，勿用力吹打细胞，尽量在4℃下操作。

7. 反应完毕后请尽快检测，因为细胞凋亡是一个动态的过程，反应1小时后荧光强度就开始衰变。

8. 成功的检测凋亡受以下几种因素的影响，如细胞类型、细胞膜上PS的密度、发生凋亡时PS翻转的比例、诱导细胞凋亡的方法、所用试剂、诱导凋亡的时间等，把这些影响因素进行优化对实验成功是非常必要的。                                                       

       此试剂盒仅供科研使用。