ELISA（酶联接免疫吸附反应分析）是以免疫学反应为基础，将抗原、抗ti的特异性反应与酶对底物的高效催化作用相结合起来的一种敏感性很高的实验技术。 由于抗原、抗ti的反应在一种固相载体-聚苯乙烯微量滴定板的孔中进行，每加入一种试剂孵育后，可通过洗涤除去多余的游离反应物，从而保证试验结果的特异性与稳定性。

实际应用中，通过不同的设计，具体的方法步骤可有多种。即：用于检测抗ti的间接法、用于检测抗原的双抗ti夹心法以及用于检测小分子抗原或半抗原的抗原竞争法等等。目我们对客户提供比较常用的ELISA双抗ti夹心法及ELISA间接法服务

特点概述

1.一性强。抗原与抗ti的免疫反应是一反应， 而免疫酶技术以免疫反应为基础,所检测的对象是抗原(或抗ti)，使用的抗ti除标记了酶以外，与普通抗ti的免疫反应特性并无多大差别。

2.灵敏度高。由于抗ti联结上了酶，因此，借助于酶与底物的显色反应，显示抗原与抗ti的结合，大大提高了检测的灵敏性,使检测水平接近放射免疫测定法。

3.样品易保存。经过酶反应显示的有色产物大多比较稳定，因此有利于样品的保存。

4.结果易观察。对检测结果即可用肉眼观察,又可用显微镜观察,也可以用分光光度计进行比色测定,还可用显微镜观察。这是因为某些酶反应产物能使电子密度发生改变，从而引起被检测物的显示。

5.可以定量测定。溶液中的抗原物质，应用酶免吸附技术进行比色测定,依据光密度值的变化，可以定量。预计用细胞分光光度计可对组织内的抗原进行免疫酶技术的定量测定。

6.可以大规模测定样品。如有成千.上万份样品需要进行检测，免疫酶技术都能在较短时间内完成。

7.仪器和试剂简单。对免疫没技术来说，不需要荧光显微镜,也不需要测定放射性的特殊仪器,所用仪器及试剂均属一般性仪器与试剂，普通实验室及生产应用单位均易购置

ELISA试剂盒样品收集、处理及保存方法：

1）血清－－－－-操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后，1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。

2）血浆－－－－-EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。

3）细胞上清液－－-1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。

4）组织匀浆－－－－-将组织加入适量生理盐水捣碎。1000×g离心10分钟，取上清液

5）保存－－－－－－如果样品不立即使用，应将其分成小部分-70 ℃保存，避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒，检测先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。

试剂盒的储存及有效期：

未开封的试剂盒：所有试剂均按试剂瓶标签上所示保存。请注意，收到试剂盒后请尽快将TMB 洗涤液，终止液保存于4℃，其他试剂保存于-20℃。

使用后的试剂盒：剩余试剂仍需按照试剂瓶标签所示的温度保存，开封后的酶标板要加干燥剂后密封保存于-20℃，避免潮湿。

稳定性：

经测定，试剂盒在有效期内按推荐温度保存，其活性降低率小于5%。

试验原理

试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）.已知浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将生wu素标记的抗ti同时温育。洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中的浓度呈比例关系。

试剂和样本的控制方法:

一、试剂

1.试剂的选择:国家明确要求要采用批批检定的形式对ELISA试剂严格把关,我司严格按照国家标准进行生产,已获得国家承认的“三证”,每一个产品都有对应的生产批号,只要客户提下单,我们就能为您提供新批次的产品,不必担心会有过期的试剂。我司的试剂,值得您选择。

2.试剂的准备:先将试剂盒先从冰箱中拿出来,在室温下放置20-30 min后,再进行测定,使试剂盒在使用与室温平衡,这样做的目的能使反应微孔内的温度较快地达到所需的温度,以满足后面的测定需求。

二、样本

1.内源性干扰因素:包括类因子、补体、高浓度的非特异免疫球蛋白、异嗜性抗体、某些自身抗体等;

类因子的控制方法:

①用F(ab)2替代完整的IgG;

②标本用联有热变性IgG的固相吸附剂处理;

③检测抗原时,可用2-巯ji乙醇加入到标本稀释液中使RF降解;

补体的控制方法:

①用EDTA稀释标本;

②56℃ 30 min加热血清使C1q灭活;

2.外源性干扰因素:包括标本溶血、细菌污染、保存时间过长或凝固不全等;

控制方法:采血时规范操作,采集的血液勿用力震荡,以防溶血;收集标本时采用无菌试管,经检测后再低温冻存;保存时间不宜过久,检测时尽量采用新鲜标本;对于凝固不全的血标本可适当加入抗凝剂,并放入37℃水中1 h,待充分凝固后再离心分离血清。

 免责声明

1. 试剂盒仅供研究使用，不得用于临床实验或人体实验，否则所产生的一切后果，由实验者承担，本公司概不负责。

2. 严格按照说明书操作，实验者违反说明书操作，后果由实验者承担。

[说 明]

1.由于现有条件及科学技术水平尚不能对所有供货商提供的所有原料进行全面的鉴定与分析，本产品可能存在一定的质量 技术风险。

2.终的实验结果与试剂的有效性、实验者的相关操作以及 当时的实验环境密切相关，请务必准备充足的标本备份。

3.不同批次的同一产品可能会有少许差别，如:检测限、灵敏度以及显色时间等，请依据试剂盒内说明书进行实验操作，网站电子版说明书仅作参考。

4.只有全部使用本试剂盒配套试剂才能保证检测效果，不能混用其他制造商的产品。只有严格遵守本试剂盒的实验说明才会得到jia的检测结果。

5.本公司只对试剂盒本身负责，不对因使用该试剂盒所造成的样本消耗负责，请使用者使用充分考虑到样本的可能使用量，预留充足的样本。

6.使用化学裂解液制备的组织匀浆或细胞提取液可能会由于某些化学物质的引入导致ELISA实验结果偏差。

7.若样本为细胞培养上清，因该类样本干扰因素较多，如:细胞状态、细胞数量、采样时间等，所以可能存在检测不出的情况。

8.某些天然蛋白或重组蛋白，包括原核及真核重组蛋白，可能因为与本产品所使用的检测抗ti及捕获抗ti不匹配，而不被检测出。