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抗凝裂解大牛血
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血清的鉴别方法
血清是从血浆中去除纤维蛋白形成的非常复杂的混合物。虽然它的大部分成分是已知的,但有些成分仍不清楚,血清的组成和含量往往因供体动物的性别、年龄、生理条件和营养条件而异。虽然对血清的组成和作用进行了大量的研究,但仍存在一些问题。
1.血清中可能有数百种成分,但其确切的成分、含量及其作用机制仍不清楚,尤其是一些多肽生长因子、激素和脂质等尚未完全了解,给研究工作带来诸多困难;
2.血清是批量生产的,批次之间差异很大,血清保存期一般一年。因此,保证每批血清的相似性其困难,限制了试验的规范性和连续性;
3.不排除血清中含有挥发性物质,认为是“瓶内变质”的原因。
血清的规范使用与保存
血清是由血浆去除纤维蛋白原而形成的一种很复杂的混合物,其组成成份虽大部分已知,但还有一部分尚不清楚,且血清组成及含量常随供血动物的性别、年龄、生理条件和营养条件不同而异。血清是血浆中不含纤维蛋白原的胶状液体,具有维持血液的正常粘度、酸碱度、渗透压等作用。
血清的规范使用与保存:
需要长期保存的血清必须储存于-20℃ - 70℃ 低温冰箱中.4℃冰箱中保存时间切勿超过1个月.由于血清结冰时体积会增加约10%,因此,血清在冻入低温冰箱,必须预留一定体积空间,否则易发生污染或玻璃瓶冻裂.
2、瓶装血清解冻需采用逐步解冻法:-20℃ 至 -70℃ 低温冰箱中的血清放入4℃冰箱中溶解1天.然后移入室温,待全部溶解后再分装.在溶解过程中需不断轻轻摇晃均匀(小心勿造成气泡),使温度与成分均一,减少沉淀的发生.切勿直接将血清从-20℃进入37℃解冻,这样因温度改变太大,容易造成蛋白质凝集而出现沉淀.
3、热灭活是指56℃, 30分钟加热已完全解冻的血清.加热过程中须规则摇晃均匀.此热处理的目的是使血清中的补体成分(complement)灭活.除非必须,一般不建议作此热处理,因为热处理会造成血清沉淀物显著增多,而且还会影响血清的质量.补体参与反应有:细胞毒作用, 平滑肌细胞收缩, 肥大细胞和血小板释放组胺, 增强吞噬作用, 促进淋巴细胞和巨噬细胞发生化学趋化和活化.
4、一般厂商提供的血清为无菌,无需再过滤除菌.如发现血清有悬浮物,则可将血清加入培养液内一起过滤,切勿直接过滤血清.
5、血清中的沉淀物 絮状物:主要是血清中的脂蛋白变性及解冻后血清中纤维蛋白造成,这些絮状物不会影响血清本身的质量.可用离心3000rpm, 5分钟去除,也可不用处理. 显微镜下"小黑点":经过热处理过的血清,沉淀物的形成会显著增多.有些沉淀物在显微镜下观察象"小黑点",常误认为血清受污染.一般情况下,此小黑点不会影响细胞生长,但如果怀疑血清质量,则应立即停止使用,更换另一批号的血清.
6、切勿将血清在37℃放置太久,否则血清会变得浑浊,同时血清中的有效成分会破会而影响血清质量
注意事项
1、如何解冻血清才不会使产品质量受损?
将血清从冷冻箱取出后,先置于2-8C冰箱使之溶解,然后在室温下使之全溶。但必须注意的是,溶解过程中必须规则地摇晃均匀如何避免沉淀物的产生?解冻血清时,请按照所建议的逐步解冻法(-2O。C至4。C至室温),若血清解冻时改变的温度太大(如-20。C至37。C),实验显示非常容易产生沉淀物。
2、解冻血清时,请随时将之摇晃均匀,使温度及成分均一,减少沉淀的发生
3、请勿将血清置于37。C太久。若在37。C放置太久,血清会变得混浊,同时血清中许多较不稳定的成分也会因此受到损害,而影响血清的质量。
4、保存方法
血清应保存在-5C至-2OC。然而,若存放于4C时,请勿超过一个月。若您一次无法用完一瓶,建议将无菌分装血清至恰当的灭菌容器内,再放回冷冻。
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