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GB/T 21916-2008水果罐头中合成着色剂高效液相色谱法
点击次数：1340 发布时间：2012/8/30 22:44:01
GB/T 21916-2008水果罐头中合成着色剂高效液相色谱法
1 范围
本标准规定了水果罐头中柠檬黄、苋菜红、靛蓝、胭脂红、日落黄、诱惑红、亮蓝、赤藓红人工合成着色剂的高效液相色谱测定方法
本标准适用于水果罐头中柠檬黄、苋菜红、靛蓝、胭脂红、日落黄、诱惑红、亮蓝、赤藓红人工合成着色剂的测定
本标准检出限为柠檬黄0.300mg/kg、苋菜红0.300mg/kg、靛蓝0.300mg/kg、胭脂红0.300mg/kg、日落黄0.150mg/kg、诱惑红0.150mg/kg、亮蓝0.100mg/kg、赤藓红0.150mg/kg
2 原理
水果罐头中的人工合成着色剂用乙醇-氨水提取，利用固相萃取柱净化，采用高效液相色谱-紫外检测器，外标法定量
3 试剂和材料
3.1 水：去离子水货相当纯度的水
3.2 甲醇：色谱纯
3.3 无水乙醇：分析纯
3.4 氨水：分析纯
3.5 盐酸：分析纯
3.6 乙酸铵溶液（0.02mol/l）：称取1.54g乙酸铵，加水溶解，定容至1000ml，经0.45um过滤器过滤
3.7 无水乙醇-氨水溶液：量取无水乙醇80ml，氨水1ml，加水定容至100ml，混匀
3.8 PH8D 50%甲醇溶液：量取甲醇50ml，加水定容至100ml，混匀，加氨水调PH值8
3.9 PH8的水：水加氨水调PH值到8
3.10 2%氨水：量取氨水2ml，加水定容至100ml，混匀
3.11 盐酸-乙醇溶液（1+9）：量取10ml盐酸、90ml乙醇，混匀
3.12 50%甲醇溶液：量取甲醇50ml，加水定容至100Ml，混匀
3.13 固相萃取柱或相当者：Sep-Pak Plus QMA360mg，颗粒度37um-55um，临用前依次加5ml甲醇（3.2）和5ml水预处理，保持柱体湿润
3.14 合成着色剂标准贮备液：准确称取按其纯度折算为100%质量的柠檬黄、苋菜红、靛蓝、胭脂红、日落黄、诱惑红、亮蓝、赤藓红各0.0500g，置100ml容量瓶中，加水至刻度，配置成500ug/ml标准储备液
3.15 合成着色剂标准使用液：临用时将标准储备液加水稀释成20ug/ml的标准中间液，再将该中间液稀释成0.100,0.200,0.400,1.00,3.00,5.00ug/ml的标准系列溶液，经0.45um过滤器过滤
4 仪器
4.1 501高效液相色谱仪，配有紫外检测器，色谱工作站
4.2 分析天平：感量0.1mg
4.3 匀浆机
4.4 快速混匀器
4.5 离心机：3000r/min
4.6 恒温水浴
4.7 0.45um水性样品过滤器
4.8 固相萃取装置
5 样品制备
5.1 提取
将整份试样用匀浆机打碎，再搅拌均匀，准确称取2.00g左右样品（精确至0.01g），装入离心管中，加10Ml无水乙醇-氨水溶液，涡旋0.5min，再3000r/min离心10Min将上清液倒入塞有脱脂棉的玻璃漏斗中过滤，将剩余残渣再重复操作三次，将收集的滤液（约40ml）置于80℃水浴中浓缩至约2ml，为试样溶液
5.2 净化
将浓缩后的试样溶液用2%的氨水调成PH8后，转移到预处理过的固相萃取中，依次用3MlPH8的水喝3MlPH8的50%甲醇以小于2ml/min的流速清洗，弃去全部流出液，再用10ml盐酸-乙醇溶液（1+9）将着色剂洗脱出固相萃取柱，手机洗脱液，用氨水中和80℃水浴浓缩至尽干，冷却后用50%的甲醇溶液溶解并定容至10Ml，经0.45um滤膜过滤后，进行高效液相色谱测定
6 测定
6.1 液相色谱条件
6.1.1 色谱柱：美国VertexC18色谱柱，4.6mm×250mm,5um
6.1.2 流动相：甲醇-乙酸铵溶液（0.02ml/l）
6.1.3 梯度洗脱：梯度洗脱条件见下表
时间/min 流速（ml/min） 甲醇% 乙酸铵溶液%
0 1.0 20 80
5 1.0 35 65
10 1.0 80 20
16 1.0 80 20
17 1.0 20 80
25 1.0 20 80
6.1.4 进样量：10ul
6.1.5 检测器：UV501紫外可见光检测器选择柠檬黄428nm、苋菜红521nm、靛蓝608nm、胭脂红509nm、日落黄483nm、诱惑红507nm、亮蓝625nm、赤藓红529nm波长测定
6.2 测定
根据保留时间定性，外表峰面积法定量
八种合成着色剂标准品
7 结果计算
X=c×V×1000/m×1000
X-试样中被测组分的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）
c-由标准曲线得到的试样溶液中被测组分的含量，单位为微克每毫升（ug/ml）
V-试样溶液定容体积，单位为毫升（ml）
m-试样质量，单位为克（g）
计算结果保留三位有效数字
8 精密度
在重复性条件下获得的两次独立测定的结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%
原创作者：杭州赛析科技有限公司销售部
