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词料中金霉素的测定高效液相色谱法GB/T 19684-2005
点击次数：450 发布时间：2012/3/15 13:33:37
词料中金霉素的测定高效液相色谱法GB/T 19684-2005
1 范围
本标准规定了以高效液相色谱（HPLC）测定饲料中金霉素的方法。
本标准适用于配合饲料、浓缩饲料和预混合饲料中金霉素的测定，检测限为1n g，检出浓度为4 mg/kg.
2 规范性引用文件
下列文件中的条款通过在本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所
有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的*新版本。凡是不注日期的引用文件，其*新版本适用于本标准。
GB /T 6 682 分析实验室用水规格和试验方法
GB /T 14699.1 饲料采样
3 方法原理
使用盐酸-丙酮溶液提取饲料中的金霉素，调至pHl.0 -1.2 ，振荡，过滤，注人反相柱分离，紫外检测器检测，外标法定量分析。
4 试荆和材料
本标准所用试剂，除特别注明外，均为分析纯。水为蒸馏水，色谱用水为去离子水，符合GB/T 6682用水的规定。
4.1 氢氧化钠溶液：400 g/L.
4.2 乙二酸（草酸）溶液：[c（1/2HZC20,）=0.01 mol/L].
4.3 盐酸溶液：[c（HCI）=4 mol/L].
4.4 提取液：丙酮十盐酸溶液（4.3）＋水＝13十1十6.
4.5 流动相：乙二酸溶液（4.2）＋乙睛（色谱纯）＋甲醇（色谱纯）=10十3十2.
4.6 金霉素标准液：
4.6.1 金霉素标准储备液准确称取金霉素标准品0.012 90g（含量大于96.9%，储存于硅胶干燥器中），精确至0.1 m g，置于50m L容量瓶中，用提取液（4.4）溶解并定容至刻度，摇匀，其浓度为250g /L,
贮于4℃～ 6℃ 冰箱中，有效期为一周。
4.6.2 金霉素标准工作液准确移取4 mI一金霉素标准储备液（（4.6.1）于10 mL容量瓶中，用超纯水稀释至刻度，摇匀，其浓度为100 g/L，现用现配。
5 仪器、设备
5.1 离心机：3 000 r/mine
5.2 pH计：精度0.0 1m V.
5.3 恒温振荡器：300 r/min.
5.4 微孔滤膜（孔径0. 45 pm）.
5.5 分析天平：感量0. 1 mgo
5.6 分析天平：感量0.0 1m g.
GB/T 19684-2005
5.7 GE-200高效液相色谱仪 GE-200高压输液泵，GE-200紫外检测器，浙大智达N2010色谱工作站，VertexC18色谱柱。
6 试样的选取和制备
按 G B/ T 14699.1 选取有代表性样品200g -500g ，用四分法缩至100g ，粉碎通过0.45m m孔径筛，充分混匀，贮于磨口瓶中备用。
7 分析步骤
7.1 称取试样lg-10g（金霉素含量大于等于40m g/kg），准确至0.1 m g，置于具塞锥形瓶中，加人
100 mL提取液（4.4），手摇2 min，再用盐酸溶液（4.3）调pH至1. 0-1. 2（记录盐酸溶液的消耗量，作为稀释倍数），盖紧塞子，置恒温震荡器（5. 3）中（振荡速度110 r/min）振荡30 mine
7.2 将提取液（7.1）倒人离心管，3000 r/min离心15 min,
7.3 取离心上清液用滤膜（5.4）过滤，滤液作为试样溶液。
7.4 HPLC测定参数的设定：
分 析柱 C18：柱长150mm，内径4.6mm，粒度5um（或类似分析柱）；
柱 温 ：室 温；
检 测 器 ：紫外检测器，检测波长375nm;
流 动 相 速度：1.0 m L/min;
进样 量 ： 10ul-20ul
7.5 定量测定：采用多点外标法，根据浓度与峰面积的线性回归方程计算金霉素的含量（g/L）
8 测定结果的计算
8.1 每千克试样中所含金霉素的质量X（mg）按式（1）计算：
X＝m1\\×n
式 中 ：
X— 每千克试样中所含金霉素的质量，单位为毫克（mg）;
M1－－HPLC试样色谱峰对应的金霉素质量，单位为微克（ug）;
m— 试样质量，单位为克（g）；
n— 稀释倍数。
8.2 测定结果用平行样测定的算术平均值表示，保留至小数点后1位。
9 允许差
两个平行测定结果的相对偏差不大于7％0
原创作者：杭州赛析科技有限公司销售部
