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杭州臻优品生物科技有限公司 主营产品:(1)ELISA试剂盒开发:双抗夹心法ELISA试剂盒、间接法ELISA试剂盒、竞争法ELISA试剂盒(2)ELISA|生化检测:ELISA检测、生化检测(3)抗体制备:定制鼠多抗、定制兔多抗、定制鼠单抗。最快3周拿到定制抗体,兔抗血清(6周)、鼠抗血清(3周)(4)抗体标记:HRP标价抗体蛋白、FITC标记抗体蛋白、Biotin标记抗体蛋白(5)抗原制备:多肽合成与偶联,原核表达蛋白

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人多肽YY(PYY)ELISA试剂盒Human PYY(Peptide YY) ELISA Kit

价格:¥电议

品牌名称:$brandModel.Title(进口品牌)型号:SYP-H0289 原产地:中国大陆 发布时间:2023/8/9 17:23:57更新时间:2024/6/18 15:41:03

产品摘要:双抗夹心,96T/48T/3000/2400

产品完善度: 访问次数:313

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手机网站:http://m.yituig.com/c169168/

商铺地址:http://www.upingbio.com

详细内容

 实验原理

本试剂盒采用双抗体夹心两步法酶联免疫吸附试验(ELISA)。在预包被抗检测蛋白抗体(固相抗体)的微孔酶标板中,加入检测蛋白校准品和待测样本再加入生物素标记抗体,经过温育与充分洗涤后,再加入HRP偶联的亲和素,经过温育与充分洗涤,去除未结合的组分,在微孔板固相表面形成固相抗体-抗原-生物素标记抗体-亲和素酶的夹心复合物。加底物A和B,产生蓝色产物,在终止液作用下,终转化为黄色,在酶标仪450nm波长上测定吸光度(OD值),吸光度(OD值)与待测样品中检测蛋白的浓度正相关。拟合校准品曲线,可以计算出样本中检测蛋白的浓度。

试剂盒组分与保存

组分

数量

主要成分

开封后储存

校准品

0.35ml/管

--

2-8℃14天

包被微孔板

96T/48T

预包被固相抗体

2-8℃14天

生物素抗体

10mL

生物素抗体

2-8℃180天

HRP标记亲和素

10mL

HRP标记亲和素

2-8℃14天

样本稀释液

6mL

PBS

2-8℃180天

底物液A

6mL

0.01%过氧化氢

2-8℃180天

底物液B

6mL

0.1%TMB

2-8℃180天

终止液

6mL

2mol/L酸

2-8℃180天

20×浓缩洗涤液

25mL

0.05%Tween20

2-8℃180天

说明书

1份

--

--

自封袋

1个

--

--

不干胶

4

--

--

 

注意:

1:使用请检查试剂盒中试剂的标签和数量与表格是否一致

2:如果试剂盒的组份需要再次使用,请确保上一次使用之后没有被污染。

3:酶标板单次未使用完,要谨记密封放到2-8℃保存。

试验所需自备试验器材 (不提供,但可协助购买)

1.标准规格酶标仪。

2.自动洗板机。

3.振荡器。

4.系列可调节移液器及吸头,一次检测样品较多时,好用多通道移液器。

5.用去离子水将 25×TBS-T 洗涤缓冲液稀释 25 倍,成 1×TBS-T 洗涤缓冲液

 

样品的准备和保存

以下只是列出样品采集和保存的一般指南。所有样本采集保存过程中,不得使用叠氮钠做为防腐剂。样品如果不立即分析,应分装后冷冻保存,且避免反复冻融。

细胞培养上清——离心去除沉淀,立即分析或分装后-20℃冷冻保存。

血清——用干净试管收集血液,室温凝固 30 分钟,离心 2000×g 20 分钟,收集血清。立即分析或分装后-20℃冷冻保存。

血浆——采用肝素、柠檬酸盐或 EDTA 抗凝,抽血后 30 分钟内在 2-8℃离心 2000×g 20 分钟。为消除血小板的影响,建议在 2-8℃进一步离心 10000×g 10 分钟。立即分析或分装后-20℃冷冻保存。

细胞裂解液——对于贴壁细胞,去除培养液,用 PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍。加入适量裂解液,用枪吹打数下,使裂解液和细胞充分接触。通常 10 后,细胞就会被裂解。对于悬浮细胞,离心收集细胞,用 PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍。加入适量裂解液,用枪吹打把细胞吹散,用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后,10000—14000×g 离心 3-5 分钟, 取上清。立即分析或分装后-20℃冷冻保存。

尿液——用无菌管收集,离心 2000×g 20 分钟。仔细收集上清。如有沉淀形成,应再次离心。

操作程序

所有试剂和组分都先恢复到室温,标准品、质控品和样品,建议做复孔。

1、按面说明书描述的方法,配制好试剂盒各种组分的工作液。

2、从铝箔袋中取出所需板条,剩余的板条用自封袋密封放回冰箱。

3、设置标准品孔、样本稀释液孔、空白孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL,样本稀释液孔加样本稀释液50μL,空白孔不加,样本孔加待测样本50μL。除空白孔外,每孔加入生物素抗体100uL,用封板膜盖住反应板,37℃水浴锅或恒温箱避光温育60min

4、揭开封板膜,弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液,静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复5次。若使用自动洗板机,请按洗板机操作程序进行洗板,添加浸泡30s的程序,可以提高检测的精度。洗板结束,加底物,要在干净不掉屑的纸上,充分拍干反应板。

5、除空白孔外,每孔加入HRP标记亲和素100uL,用封板膜盖住反应板,37℃水浴锅或恒温箱避光温育20min。

6、重复步骤4。

7、将底物A和B按1:1体积充分混合,所有孔中加入底物混合液100μL用封板膜盖住反应板,37℃水浴锅或恒温箱避光温育15min。

8、所有孔加入终止液50μL,在450nm波长酶标仪上读取各孔吸光度(OD值)。

结果计算

9、以标准品浓度做为坐标,对应的吸光度(OD值)作为坐标,利用计算机软件,采用四参数Logistic曲线拟合(4-pl),创建标准曲线方程,通过样本的吸光度(OD值),利用方程计算样品的浓度值。ELISA Calc软件计算

10、如果样品被稀释,通过上述方法测的的浓度值,要乘以稀释倍数,才是样品的终浓度。

经典数据

1)标准曲线:
以下数据和曲线仅供参考,实验者需根据自己的实验建立标准曲线。每次检测,每块酶标板都必须设立标准曲线。

2)精密度:

批内精密度:三组已知的高、中、低浓度样品,进行二十次在同一个板块内精度评估。

批间精密度:三组已知的高、中、低浓度样品,进行二十次在不同板块内精度评估。

 

 

批内变异系数

样本

1

2

3

数量

20

20

20

平均值(250)

68.59

299.38

1040.75

标准差

5.46

14.88

68.27

变异系数 (%)

7.96

4.97

6.56

 

 

批间变异系数

样本

1

2

3

数量

20

20

20

平均值(250)

71.88

280.16

1060.72

标准差

6.43

26.56

103.95

变异系数 (%)

8.94

9.48

9.8

 

3)灵敏度:

低检出剂量小于15.63 pg/mL(6 次独立实验的平均值)。

10 个零标准品浓度 OD 的平均值加上两倍 SD,计算低可检测浓度。

4)回收率:

分别往不同样本中添加已知的高、中、低浓度目的蛋白样品,进行五次在同一个板块内回收率评估,回收率在85%-115%之间。

样本类型

回收率范围(%)

平均回收率(%)

血清(n=5)

89-102

95

血浆(EDTA)(n=5)

89-106

98

细胞培养基(n=5)

86-101

95

5)稀释线性:

将添加有高浓度牛白介素8(IL-8)ELISA试剂盒的样本分别稀释 2 倍,4 倍,8 倍,16 倍做回收实验,得出回收率范围及平均回收率。

 

 

血清

血浆(EDTA)(n=5)

细胞培养基(n=5)

1:2

回收率范围(%)

95-113

94-111

93-110

平均回收率(%)

96

98

96

1:4

回收率范围(%)

82-115

85-112

86-112

平均回收率(%)

97

97

98

1:8

回收率范围(%)

86-111

86-113

94-108

平均回收率(%)

102

96

103

1:16

回收率范围(%)

91-113

84-108

94-105

平均回收率(%)

98

98

99

 

 

热门标签:62.5-2000 pg/mL 

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