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DPPH 自由基清除能力试剂盒说明书
点击次数： 85发布时间：2011/3/7
- 上 传 者： 上海研玘生物技术有限公司
- 上传时间： 2024/2/23 11:39:55
- 文件大小： 308KB
- 文件类型： pdf
- 所属分类： 应用方法
- 下载次数： 0次
- 查看次数： 85
资料简介：
(50 管/48 样) 
二、试剂组成与配置：
试剂名称 规格 保存 备注 试剂一 工作液粉剂×1 瓶 4℃避光 临用甩几下使试剂落入底部，再加入 40mL无水乙醇充分溶解后备用；用不完的试剂 4℃避光保存 试剂二 标准品粉剂×1 支 4℃ 制作标准曲线用
三、所需仪器和用品：
可见光分光光度计、1mL 比色皿（光径 1cm）、离心机、移液器、无水甲醇、无水乙醇、蒸馏水。
四、实验步骤：
操作请仔细阅读第六点《注意事项》,了解相关注意点。
1、样本处理：
① 组织样本：称取约 0.1g 组织，剪碎，加入 1mL 的 80%甲醇溶液（或按样本重量 g：80%甲醇溶液体积 mL 为1:10 或 1:5 的比例加），冰水浴匀浆，12000 转/分钟，离心 10 分钟，取上清置冰上待测。
② 液体样本：直接检测，若浑浊，离心后取上清测定。
2、操作步骤：（EP 管中操作）
（注：做预试时若 A 测定－A 对照接近或小于 0.05，则需对样本进行稀释后再检测，稀释倍数代入公式计算；若样本较多，建议分批次测定；空白管只需做 1-2 个） 对照管 测定管 空白管 样本（μL） 400 400 80%甲醇（μL） 600 400 工作液（μL） 600 600 混匀，室温 25℃避光静置 30min，4000 转/分钟离心 5 分钟，波长 517nm，吸取 800μL 至比色皿中，无水乙醇调零，测定各管吸光度值。
五、结果计算：
1、标准曲线制作：
（将标准品粉剂一支加无水甲醇 2mL 溶解，即为 0.5mg/mL（Trolox）标准应用液，再用无水甲醇分别稀释成 5μg /mL、10μg/mL、15μg /mL、20μg /mL、25μg /mL 参照下表代入操作）
标准品浓度(μg /mL) 0 5 10 15 20 25 标准液（μL） 400 400 400 400 400 400 工作液（μL） 600 600 600 600 600 600 混匀，室温 25℃避光静置 30min，波长 517nm，1cm 光径，无水乙醇调零，测定各管吸光度 
2、DPPH 自由基清除率（%）=(1-(A 测定－A 对照)÷A 空白)×100%
3、定义：用从标准曲线算得的相当于抗氧化剂 Trolox 的量来表示样本的 DPPH 自由基清除能力。
4、计算公式：
六、注意事项：
1、样本测试一定要进行预试，一方面了解本批样品情况（或所需稀释倍数），否则如果清除率太大（≥90），计算结果偏低；另一方面也可熟悉实验流程，避免样本与试剂的浪费；
2、标准曲线也可根据需要来调整标准浓度，上限不大于 25μg/mL；
3、因乙醇易挥发，所以不建议用酶标仪来读数；
4、操作时应在一个通风条件良好的环境中进行，以免吸入过量甲醇中毒；
5、本试剂盒仅用于科研。
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