细胞就像是我们的孩子，每一步都需要精心呵护，在对于不准备做实验、长时间不使用的细胞，我们就要将他们保存起来，俗称冻存。

但是如果冻存不到位，就很有可能会伤害到细胞，导致死细胞过多或者直接死亡，如何进行高活率的冻存尤其关键。

细胞的生长特性一般分为贴壁、悬浮和半贴壁，他们的冻存操作也有些许不同，让我们一起来看一下。

01、贴壁细胞冻存步骤

1、将需要冻存的细胞去上清

2、用PBS润洗一下贴壁细胞

3、去上清，加入适量胰酶，进行消化（在这过程中时刻关注消化进度）

4、将消化下来的细胞用完全培养基终止消化，放入15ml离心管中

5、离心1000rpm，5min，离心好后去上清，收集细胞沉淀

6、加入适量的无血清冻存液，将细胞沉淀吹匀分装到2ml的冻存管中

7、直接将装有细胞的冻存管放入-80冰箱

8、48小时后可转入液氮罐中保存

02、悬浮细胞冻存步骤

1、将需要冻存的细胞悬液放入15ml离心管中

2、离心1000rpm，5min，离心好后去上清，收集细胞沉淀

3、加入适量的无血清冻存液，将细胞沉淀吹匀分装到2ml的冻存管中

4、直接将装有细胞的冻存管放入-80冰箱

5、48小时后可转入液氮罐中保存

03、半贴壁细胞冻存步骤

1、将需要冻存的细胞悬液放入15ml离心管中

2、用PBS润洗一下贴壁细胞

3、去上清，加入适量胰酶，进行贴壁细胞消化（在这过程中时刻关注消化进度）

4、将消化下来的细胞用完全培养基终止消化，放入15ml离心管中

5、将收集到的悬浮细胞和贴壁细胞悬液分别离心1000rpm，5min

6、离心好后去上清，收集细胞沉淀

7、加入适量的无血清冻存液，将两个细胞沉淀放在一起混匀

8、分装到2ml的冻存管中

9、直接将装有细胞的冻存管放入-80冰箱

10、48小时后可转入液氮罐中保存

注意事项

1、疏松贴壁的细胞在用PBS润洗时，只能轻轻晃动，不可直接吹洗。

2、在消化过程中尽量不要消化过度。

3、根据冻存量来加入无血清冻存液，建议1ml/支。

4、冻存密度一般为一个T25长到80%左右冻存一支，或者进行细胞计数，密度在5×105-1×107/ml。

5、分装到冻存管后的细胞应及时放入-80冰箱，减少在外存放时间。

6、在-80冰箱必须存放48小时以后才可转入液氮罐中。

温馨提示

如不是使用无血清冻存液，则需提前将冻存液配置好，并且需要程序降温。

原创作者：上海富衡生物科技有限公司