HNEpC 细胞（人鼻黏膜上皮细胞）的培养对于研究鼻腔相关的生理功能、疾病机制以及药物研发等具有重要意义。以下是一份详细的 HNEpC 细胞培养攻略。

一、培养前准备

1. 细胞来源与质量检测确保获取可靠来源的 HNEpC 细胞，可从正规的细胞库或经过验证的实验室获取。在收到细胞后，应立即进行细胞活力检测，如台盼蓝拒染法，以评估细胞的初始状态和存活率。一般来说，活细胞不会被台盼蓝染色，而死细胞会被染成蓝色。细胞存活率应在较高水平（通常 80% 以上）为宜，以保证后续培养的顺利进行。

2. 培养器材与试剂准备准备合适的培养容器，如培养瓶或培养皿，需确保其无菌。常用的培养瓶规格有 25cm?、75cm? 等，可根据细胞培养的数量和实验需求选择。准备细胞培养基，HNEpC 细胞通常需要特定的上皮细胞培养基，其中可能包含多种营养成分，如必需氨基酸、维生素、无机盐等，以及一些生长因子如表皮生长因子（EGF）等，以支持细胞的生长和分化。此外，还需准备胎牛血清，一般血清添加比例为 5% - 10%，胎牛血清能为细胞提供丰富的营养和生长因子，但使用前需进行热灭活处理，以去除可能存在的补体等对细胞有影响的成分。同时，准备好胰蛋白酶或其他合适的消化酶，用于细胞的传代培养。还需准备无菌的 PBS 缓冲液，用于清洗细胞。

二、细胞培养操作

1. 细胞接种将培养瓶或培养皿在超净工作台中用紫外线照射消毒 30 分钟左右。从液氮罐或细胞库中取出 HNEpC 细胞，迅速放入 37℃水浴锅中解冻，解冻过程要轻柔摇晃，使其尽快解冻但避免细胞受损。解冻后的细胞悬液用培养基稀释后，以适当的细胞密度接种到培养容器中。例如，对于一个 25cm? 的培养瓶，初始接种细胞数量可为 5×10? - 1×10?个。接种后，将培养瓶轻轻摇晃，使细胞均匀分布，然后放置在 37℃、5% CO?的培养箱中培养。

2. 培养条件维持细胞培养箱的温度应严格控制在 37℃，温度波动过大可能影响细胞的生长和代谢。CO?浓度保持在 5%，CO?主要用于调节培养基的 pH 值，使其维持在细胞生长适宜的范围内。定期检查培养箱的水盘，确保有足够的无菌水，以保持培养箱内的湿度。每天观察细胞的生长状态，可通过显微镜观察细胞的形态、密度等。HNEpC 细胞在正常生长情况下，应呈现出上皮细胞特有的形态，如多边形等，细胞之间连接紧密。当细胞密度达到 80% - 90% 左右时，需进行传代培养。

3. 细胞传代当细胞需要传代时，先将培养瓶从培养箱中取出，在超净工作台中倒掉培养基，用无菌的 PBS 缓冲液轻轻清洗细胞 2 - 3 次，以去除残留的培养基和细胞代谢产物。然后加入适量的胰蛋白酶（一般 0.25% 胰蛋白酶为宜），使其覆盖细胞表面，放入 37℃培养箱中消化 1 - 3 分钟，具体消化时间根据细胞的状态和实验经验确定。当在显微镜下观察到细胞开始变圆并从培养瓶壁上脱落时，立即加入含有血清的培养基终止消化。轻轻吹打细胞悬液，使细胞分散均匀，按照合适的比例（如 1:2 或 1:3）进行传代接种到新的培养容器中，继续培养。

三、注意事项

1. 无菌操作整个细胞培养过程必须严格遵守无菌操作原则。在超净工作台中进行操作时，应提前开启风机和紫外线灯进行消毒。操作人员需穿戴无菌工作服、手套和口罩，使用的器械和试剂等均需经过严格的灭菌处理。任何污染都可能导致细胞培养失败，因此要格外小心。

2. 细胞冻存为了保证细胞的保存和后续使用，需进行细胞冻存。当细胞生长状态良好时，可将细胞消化后制成细胞悬液，加入适量的冻存液（一般包含血清和 DMSO 等），调整细胞密度至合适范围（如 1×10? - 5×10?个 /ml）。将细胞悬液分装到冻存管中，标记好细胞名称、冻存日期等信息，然后按照一定的降温程序（如先在 4℃放置 30 分钟，再转移至 - 20℃放置 1 - 2 小时，放入 - 80℃冰箱过夜，次日可转移至液氮罐中保存）进行冻存。

3. 定期检测定期对培养的 HNEpC 细胞进行检测，包括细胞形态观察、细胞活力检测、微生物污染检测等。如发现细胞形态异常、生长缓慢或出现污染迹象，应及时采取措施，如丢弃污染的细胞、排查污染原因等，以保证细胞培养的质量和实验结果的可靠性。

通过以上规范的操作和注意事项，能够有效地培养 HNEpC 细胞，为相关的研究和实验提供良好的细胞模型。

原创作者：上海富衡生物科技有限公司