细胞传代培养是细胞生物学研究中一项极为重要的技术，它能够使细胞在体外持续增殖生长，为众多实验提供充足的细胞样本。以下是细胞传代培养的基本实验方法和步骤：

一、实验前准备

首先，需要确保超净工作台已开启并正常运行，用紫外线照射 30 分钟进行消毒。准备好所需的实验器材，如培养瓶、移液管、离心管、移液器等，并经过高压灭菌处理。同时，配制好新鲜的培养基，预热至 37℃。

二、细胞观察与处理

从培养箱中取出待传代的细胞培养瓶，放置在显微镜下观察细胞的生长状态。健康的细胞应呈现出贴壁生长且分布均匀、形态正常的特征。若细胞已长满培养瓶底部约 80% - 90%，则可进行传代操作。

先将旧培养基小心地吸弃，注意不要碰到贴壁的细胞。然后用适量的磷酸盐缓冲液（PBS）轻轻冲洗细胞表面 2 - 3 次，以去除残留的培养基和血清，防止其对胰蛋白酶的活性产生影响。

三、细胞消化与分离

向培养瓶中加入适量的胰蛋白酶消化液，使其均匀覆盖细胞表面，随后将培养瓶放入 37℃培养箱中孵育 2 - 5 分钟。在显微镜下密切观察细胞，当看到细胞变圆、细胞间隙增大时，表明消化已适度。立即加入等体积的含血清培养基终止消化反应，因为血清中含有胰蛋白酶抑制剂，能够防止过度消化对细胞造成损伤。

接着，用移液器轻轻吹打细胞，使细胞从培养瓶底部脱离并分散成单细胞悬液。吹打时动作要轻柔且均匀，避免产生过多气泡，以免损伤细胞。

四、细胞计数与接种

取少量细胞悬液进行细胞计数，根据计数结果和实验需求，将细胞悬液稀释到合适的浓度。然后将适量的细胞悬液接种到新的培养瓶或培养皿中，一般按照每平方厘米 5000 - 10000 个细胞的密度进行接种。接种后，轻轻晃动培养瓶或培养皿，使细胞均匀分布，将其放入 37℃、5% CO?的培养箱中培养。

细胞传代培养的每一个步骤都需要严谨操作，任何细微的失误都可能影响细胞的生长状态和后续实验结果。只有熟练掌握并严格遵循实验方法和步骤，才能在细胞培养工作中取得良好的效果，为科学研究提供可靠的细胞材料。

原创作者：上海富衡生物科技有限公司