细胞复苏在细胞培养工作里占据着极为关键的地位，其规范有序的操作流程对保障细胞良好活性与后续顺利生长起着决定性作用。

在正式开启复苏操作前，一系列准备事项必须妥善完成。把水浴锅预先加热到 37℃，并且仔细校验其温度的稳定性，保证整个复苏过程中温度能始终维持在适宜水平。同时，准备充足且已预热至 37℃的完全培养基，放置于超净工作台内，方便后续随时取用。另外，认真检查离心管、移液管等各类耗材，确认其处于无菌状态且已准备妥当。

随后，迅速从液氮罐中取出装有细胞的冻存管。此过程动作一定要快，减少冻存管在液氮外的暴露时长，防止细胞因温度急剧上升而遭受损伤。取出后立即将冻存管置于 37℃水浴锅中，轻轻晃动，促使冻存液快速均匀地融化。正常情况下，融化时间大概控制在 1 至 2 分钟，待冻存液仅留存少量冰晶时便可取出。

接着，使用 75% 酒精对冻存管外表面进行仔细消毒处理，然后在超净工作台里小心开启冻存管，将细胞悬液缓缓转移至预先备好的离心管中，添加适量预热的完全培养基，轻柔地混匀，借此稀释冻存液，降低其对细胞可能产生的不良影响。

之后，把离心管放置到离心机里进行离心操作，转速通常设定在 1000 至 1500rpm，离心时长为 3 至 5 分钟，以便细胞沉淀。离心结束后，谨慎地弃去上清液，操作过程中切不可触动细胞沉淀。

再向离心管内加入适量新鲜的完全培养基，用移液器轻柔地吹打细胞沉淀，使细胞重新均匀分散形成单细胞悬液。将细胞悬液转移至培养瓶或者培养皿中，依据细胞自身特性与生长需求，调整合适的细胞接种密度，一般每平方厘米约 5×10? 至 5×10?个细胞。

把培养瓶或培养皿放置在温度为 37℃、二氧化碳浓度为 5% 的细胞培养箱中开始培养。在培养起始阶段，要密切留意细胞的贴壁状况以及生长态势，通常在复苏后的 24 小时内实施观察。倘若察觉到细胞出现异常现象，比如大量细胞处于漂浮状态、细胞形态发生改变等，必须及时查找原因并采取恰当举措予以处理。

严格依照这一细胞复苏的标准流程进行操作，能极大地提升细胞复苏的成功率，为细胞在后续培养进程中的健康生长与功能展现奠定坚实基础，从而有力地推动细胞相关科研工作与实验的顺利开展。

原创作者：上海富衡生物科技有限公司