在细胞生物学研究领域，利用 G418 对 293T 细胞进行筛选是常见操作，旨在获取稳定转染特定基因的细胞株，以下详述浓度与操作要点。

筛选浓度确定：293T 细胞对 G418 较为敏感，筛选浓度多在 200 - 800μg/mL 区间，但*适配浓度需预实验摸索。准备多组六孔板，每孔铺适量且等量 293T 细胞（约 5×10?个 /mL），待细胞贴壁、状态良好（24 小时后），分别加入含不同浓度 G418（如 200μg/mL、400μg/mL、600μg/mL、800μg/mL）的完全培养基，每日观察细胞形态与存活状况。通常，4 - 7 天内，合适浓度下未转染抗性基因的细胞会大量死亡、脱落，而留存细胞有抗性，以此确定后续正式筛选浓度，多数情况 400 - 600μg/mL 效果佳。

操作注意事项：
细胞状态把控：筛选前确保 293T 细胞处于对数生长，活力超 90%，密度适中、分布均匀且无明显污染。不健康细胞易在筛选压力下全军覆没或出现非特异性死亡，干扰筛选结果。
药物溶解储存：G418 粉末用无菌 PBS 或超纯水溶解配成储备液（如 100mg/mL），经 0.22μm 滤膜除菌后，按单次用量小份分装，避光 - 20℃冻存，避免反复冻融致药效降损。使用时依预实验浓度，在预热培养基里稀释。

筛选全程监测：筛选过程每日镜检，记录细胞存活、形态变化。初期细胞可能皱缩、变圆，若死亡过多，要反思是否浓度过高、细胞起始状态差等；存活细胞逐步增殖形成抗性克隆，可适时换液维持营养、稳定药物浓度。
克隆挑选时机：筛选约 10 - 14 天后，抗性克隆清晰可见，挑选时用无菌移液器头小心吸取，移至新孔扩增培养，过程轻缓防损伤细胞，后续经 PCR、蛋白免疫印迹等验证克隆基因整合与表达，确保筛选成功。

掌握浓度与严谨操作，才能借 G418 高效筛选出理想的 293T 抗性细胞株，为基因功能、重组蛋白表达等研究筑牢基础。

原创作者：上海富衡生物科技有限公司