小干扰 RNA（siRNA）转染细胞是分子生物学研究基因功能的关键手段，精妙的操作技巧可大幅提升转染效率与实验成功率。

细胞状态把控首当其冲。进行转染前，要确保细胞处于对数，健康且活力充沛，密度适中。比如贴壁细胞，汇合度维持在 50% - 80% 为佳，过疏转染试剂与核酸比例难适配，过密则营养匮乏、代谢废物堆积影响细胞膜通透性，阻碍 siRNA 进入。可依据细胞生长曲线，预估合适铺板时间与密度。

转染试剂甄选不容小觑。市场试剂多样，需依细胞类型 “量体裁衣”。脂质体类通用性强，对常见肿瘤细胞系效果好，但对原代细胞可能毒性大；阳离子聚合物类适配敏感细胞，像神经细胞、干细胞，不过使用浓度需精细摸索。先小范围预实验，对比不同试剂在目标细胞转染后荧光标记 siRNA 的摄取、细胞毒性情况，优先。

核酸与试剂比例优化是关键环节。严格依试剂说明书，按梯度设置 siRNA 与转染试剂配比，如从 1:1 到 1:5，多组平行测试，借助荧光定量 PCR、蛋白免疫印迹检测基因沉默效果，锁定沉默效率且细胞毒性的比例，此平衡决定转染成效优劣。

操作流程细节关乎全局。制备 siRNA 与转染试剂复合物时，用无血清培养基稀释，轻柔混匀避免剧烈震荡致复合物破坏；孵育时长依细胞而异，一般 20 - 30 分钟，期间维持适宜温湿度，之后缓慢滴加至细胞，轻晃培养板助均匀分布。转染后，适时更换新鲜含血清培养基，补充养分、稀释残留试剂减毒性。

环境因素稳定是隐形支撑。操作全程在超净台防污染，温度恒定 37℃、CO?浓度 5% 的细胞培养箱确保细胞稳定生长代谢，微小环境波动都可能牵一发而动全身，干扰转染进程。掌握这些技巧，方能让 siRNA 顺畅 “潜入” 细胞，解锁基因沉默奥秘，助力科研探索。

原创作者：上海富衡生物科技有限公司