细胞培养过程中，如果由于污染导致背景脏，并出现黑点，可以采取以下步骤来处理：

确认污染类型

1. 肉眼观察培养基状态：首先，观察培养基的颜色和浑浊度。

2. 显微镜观察：使用显微镜观察黑点的形状、大小和是否运动。黑点的运动性（如布朗运动或直线型快速移动）以及形状（如点状、杆状）可以提供污染类型的线索。

不同污染区分：

• 细菌污染：肉眼观察到培养液浑浊变黄，培养瓶顶部有一层细沙一样的东西。细菌在显微镜下为黑色细沙状，根据感染细菌的不同，可有不同的外形，有球形，链形，杆形等。

• 霉菌污染：污染早期，培养液是清亮的。随着污染情况的加重，培养液中慢慢地出现絮状杂质，镜下可见呈细丝状的团状漂浮物，如同风中柳絮。*终，会出现肉眼可见的霉菌菌团。

• 真菌污染：真菌污染和霉菌污染差不多。一般污染早期培养液清亮，所以很难在污染早期发现。显微镜下可以观察到像丝状，或者像珊瑚状的真菌，慢慢地会长出很细的黑色丝状物。

• 支原体污染：支原体体积十分微小，普通光学显微镜下不可见。而且培养液一般也不会有明显变化，细胞病变也不很明显，只是会生长变慢或者细胞状态老化。另外，支原体污染导致细胞状态变差，也可能会出现背景变脏，小黑点变多的情况。但是支原体污染后，可能影响细胞的生长参数、细胞代谢等。因此在进行实验前，建议进行支原体检测，确认细胞无支原体污染，才能保证实验数据可靠。

针对不同污染类型的处理措施

01

细菌污染

• 轻度污染：可使用含有抗生素的无菌PBS进行多次清洗，培养基中添加抗生素培养。*常使用的抗生素是青霉素和链霉素，青霉素的推荐工作浓度是100U/mL，链霉素的推荐工作浓度是100 μg/mL。o如果细胞耐受性比较强，可以提高抗生素用量至5~10倍，进行冲洗或者短期处理。

• 重度污染：建议丢弃受污染的细胞和培养基，清洗培养设备和实验台，并使用紫外线灯或臭氧发生器对实验室进行消毒。

青霉素-链霉素溶液（FH3901）

02

真菌污染

• 真菌污染较难去除，且真菌孢子易飘散，污染实验室。一旦发现真菌污染，建议丢弃受污染的细胞和培养基，并对培养箱及操作台进行消毒。

• 如果细胞比较珍贵，可以使用两性霉素进行处理，两性霉素的推荐工作浓度为2.5μg/mL。如果细胞耐受性比较强，可以提高抗生素用量至5~10倍，进行冲洗或者短期处理。

水溶性两性霉素B

03

支原体污染

• 支原体是*小的微生物，无法通过光学显微镜直接观察，但可通过电镜或特定检测方法确认。

• 若细胞比较珍贵，且污染后状态尚可，可尝试添加支原体清除剂培养2-3代进行清除。若污染严重，建议丢弃。

富衡生物支原体清除剂（FH5001）

04

黑胶虫污染

• 黑胶虫污染后培养液颜色不变化，也不浑浊。显微镜下观察可见细胞间隙存在布朗运动的黑色异物。

• 若细胞比较珍贵，且污染后状态尚可，可尝试添加黑胶虫清除剂培养2-3代进行清除。

• 由于目前黑胶虫到底是什么生物，还存在争论。建议处理黑胶虫污染还是要需要根据具体情况，采取适当的措施，多清洗、多观察细胞状态。

富衡生物黑胶虫清除剂（FH4001）

日常预防措施

1. 严格无菌操作：确保所有操作都在无菌条件下进行，使用无菌试剂和耗材。

2. 定期清洁消毒：经常清洁培养设备和实验台，保持实验室的整洁和无菌状态。

3. 质量监控：定期检查培养基的质量，包括水质、容器等，确保符合培养要求。

4. 细胞管理：掌握细胞传代的*佳时机，避免细胞生长过老或破碎产生残骸。同时，注意血清等试剂的保存和使用，避免反复冻融导致质量下降。

总结一下，细胞培养中的污染问题还是要以“预防为主”为原则，同时做到“早发现，早处理”。