国庆七天假期一晃眼就过去了（哀嚎一片~），又该收起放假的状态将假期前冻存的细胞复苏起来了，实验进度可不会因为你的假期搁置。如果要让假期前冻存的细胞恢复到之前的状态，希望以下几点可以帮助到你。

01 减少冻存细胞接触室温的时间：

尽量减少细胞从液氮或 -80℃冰箱取出到解冻在室温中的时间（尽量控制在1min内），否则会大大影响细胞活力。如果冰箱（液氮罐）和水浴锅相隔较远（脚步路程超1min以上），可用泡沫箱（或其他隔热容器）装些干冰或液氮临时保存和运送细胞。

(注意：从液氮中取细胞时要佩戴好护目镜和手套，谨防冻伤及冻存管爆炸！)

02 解冻细胞

1. 从液氮或-80℃取出冻存细胞后，放入37℃水浴锅中，持续摇晃1-2min直至解冻。（若发现冻存管内沁入少量液氮可拧松管盖，防止解冻过程中冻存管炸裂）

2. 不要将冻存细胞完全升温至37℃或常温，细胞冻存液中的DMSO在常温条件下对细胞有毒性极大影响细胞活力。

3. 不要靠室温去解冻细胞，会让细胞内产生冰晶导致细胞死亡。

4. 水浴解冻时冻存管管口要高于水面，避免水流入冻存管，水浴锅中的无菌水也要定期更换。

03 复苏操作

解冻后应尽快将冻存管中的细胞移至含5ml完全培养基的离心管中进行离心，以减少DMSO对细胞的毒害。然后离心并弃去上清液，补加4-6mL完全培养基重悬细胞，接种于T25培养瓶中（或6cm皿中）。

注意：冻存后的细胞尽量接种到高密度的培养环境，以便细胞更好地恢复状态。

04 换液以及后续培养

依据细胞状态，在细胞贴壁后或24h后换液，去除死细胞和残留物。之后密切观察细胞生长状态，及时调整培养条件。