紫外-可见分光光度计的应用-用双波长法测定混浊样品 由于一些材料成分复杂和样品混浊，给分光光度法带来了困难。为此，或是改变材料本身，如从制样考虑，降低悬浮液的混浊度；或从改进仪器着手，如用积分球的办法收集散射光；或用乳白玻璃法减轻散射的影响，但都不能从根本上解决问题。1951年B.Chance及其同事为了研究细胞色素，对仪器和测定技术作了进一步的改进，摸索了双波长法，试制了台双波长分光光度计。以后，Bulter和Bruit教授用此法来测定水果成熟的程度。双波长法解决了由于样品混浊而引起的测定误差。同时，这种新的设计还带来了许多优点。 由于样品混浊产生的散射和非特征吸收信号常常干扰欲测的特征吸收信号，致使测定失败。尤其在进行动力学测量中发生变化，如中间产物（它们可能就是欲测的组分）存在的时间短，且散射的情况可能在测定过程中发生变化，这就更增加了测量的困难。为了除去这些非特征信号，从理论上说可以有三种办法：电学法、双光束法和双波长法。前二者都有不可克服的困难。双波长法是不用参考溶液，是两个不同波长的单色光交替通过代测的混浊样品，然后对通过此样品的两个波长的吸收信号进行测量并加以比较。 如把一个波长λe选在欲测组分吸收带的峰值上，另一波长λR选在欲测组分吸收带的凹谷上，那末这两个波长的光束通过样品后所引起的吸收信号差就应该仅仅是欲测的特征信号了。B.Chance根据这一设想设计了世界上台双波长分光光度计。随着科学技术的不断发展，双波分光光度计已越来越完善了。

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